1996 年度実績報告書

ヒト・ゴナドトロピンα鎖の糖鎖構造の調節に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号	07671775
研究機関	名古屋大学
研究代表者	近藤育代名古屋大学, 医学部, 講師 (40215447)
研究分担者	菅沼信彦名古屋大学, 医学部, 助教授 (30179113)
キーワード	ゴナドトロピン / α鎖 / 糖鎖構造 / 塩基特異的突然変異作製法
研究概要	ゴナドトロピンは、下垂体あるいは胎盤で合成・分泌される糖蛋白ホルモンで、FSH、LHは性腺機能の調節に、hCGは妊娠の維持に重要な役割を果たしている。各ホルモンは共通のα鎖と、ホルモン特異的なβ鎖から構成され、各々アスパラギン(N)結合型糖鎖を有している。糖鎖終末に注目した場合、硫酸基(SO_4)か、シアル酸(SA)かの違いはそのホルモンの血中半減期に影響を与え、生物学的作用に大きな役割を占める。LHの糖鎖終末はSO_4-Nアセチルガラクトサミン(GalNAc)で、FSH、hCGはSA-ガラクトースであるが、糖鎖終末の調節機構はいまだ明らかではない。最近α鎖において糖鎖結合部位の前に存在するPro-Leu-Argが、GalNAcトランスフェラーゼの作用に必要であることが示された。しかしながら、細胞内における糖鎖終末に果たすP-L-Rの役割や、α鎖に存在する2つのN結合型糖鎖(Asn^<52>;Al、Asn^<78>;A2)ともにSO_4が糖鎖終末になるのかは、依然不明であった。そこで、ヒト・ゴナドトロピンα鎖において、P-L-RのSO_4終末に対する意義を明確にすることを目的とし研究を行った。塩基特異的突然変異作製法を用い、各々Pro^<40>-Leu^<41>-Arg^<42>を規定するコドン、Asn^<52>を規定するコドン、Asn^<78>を規定するコドンを他のアミノ酸コドンに変換することにより3種の変異遺伝子を作製した。その変異遺伝子を発現ベクターに挿入後、有核細胞に導入し、発現される変異α鎖の糖鎖をアイソトープ標識SO_4あるいはCysでラベルするとともに、各種グリコシダーゼを用いて糖鎖終末を解析した。その結果、P-L-RをAla-L-Alaに変換してもN結合糖鎖のSO_4終末は変化しなかったが、セリン結合糖鎖の付加が起こった。この結果より、P-L-R配列はヒト・ゴナドトロピンα鎖のN結合糖鎖のSO_4終末化に対し影響を与えないことが示された。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Nobuhiko Suganuma: "Effects of the mutations (Trp^8→Arg and Ile^<15>→Thr) in human luteinizing hormone (LH) β-subunit on LH bioactivity in vitro and in vivo" Endocrinology. 137. 831-838 (1996)
[文献書誌] Madoka Furuhashi: "Disulfide bonds 7-31 and 59-87 of the α-subunit play a different role in assembly of human chorionic gonadotropin and lutropin" Ecdocrinology. 137. 4196-4200 (1996)
[文献書誌] Shintaro Tate: "Direct effects of estradiol and tamoxifen on gene expressions of inhibin α-and βA-subunits in rat granulosa cells in vitro" Endocrine J.43. 621-628 (1996)
[文献書誌] Takayuki Moriwaki: "Alteration of N-linked oligosaccharide structures of human chorionic gonadotropin β-subunit by disruption of disulfide bonds" Glycoconjugate J.(in press). (1997)
[文献書誌] David Ben-Menahem: "The bidogic action of single chain clwriogonadotropin is uneoupled from the native heterodimetric interaction between the α and β subunits" J.Biol.Chem.(in press). (1997)
[文献書誌] Kazuo Hanai: "Effects of gonadotropin,estrogen and progesterone on e-mos gene expression in mouse oocytes in vivo and in vitro" J.Obstet,Gynaecol.Res.(in press). (1997)
[文献書誌] 菅沼信彦: "Annual Review内分泌・代謝1997(分担:LH構造異常症)" 中外出版社(岡博、金澤康徳、武谷雄二、田中孝司、編), 282(50-53) (1997)

1996 年度 実績報告書

ヒト・ゴナドトロピンα鎖の糖鎖構造の調節に関する研究

研究代表者

近藤 育代 名古屋大学, 医学部, 講師 (40215447)

研究成果

[文献書誌] Nobuhiko Suganuma: "Effects of the mutations (Trp^8→Arg and Ile^<15>→Thr) in human luteinizing hormone (LH) β-subunit on LH bioactivity in vitro and in vivo" Endocrinology. 137. 831-838 (1996)

[文献書誌] Madoka Furuhashi: "Disulfide bonds 7-31 and 59-87 of the α-subunit play a different role in assembly of human chorionic gonadotropin and lutropin" Ecdocrinology. 137. 4196-4200 (1996)

[文献書誌] Shintaro Tate: "Direct effects of estradiol and tamoxifen on gene expressions of inhibin α-and βA-subunits in rat granulosa cells in vitro" Endocrine J.43. 621-628 (1996)

[文献書誌] Takayuki Moriwaki: "Alteration of N-linked oligosaccharide structures of human chorionic gonadotropin β-subunit by disruption of disulfide bonds" Glycoconjugate J.(in press). (1997)

[文献書誌] David Ben-Menahem: "The bidogic action of single chain clwriogonadotropin is uneoupled from the native heterodimetric interaction between the α and β subunits" J.Biol.Chem.(in press). (1997)

[文献書誌] Kazuo Hanai: "Effects of gonadotropin,estrogen and progesterone on e-mos gene expression in mouse oocytes in vivo and in vitro" J.Obstet,Gynaecol.Res.(in press). (1997)

[文献書誌] 菅沼信彦: "Annual Review内分泌・代謝1997(分担:LH構造異常症)" 中外出版社(岡博、金澤康徳、武谷雄二、田中孝司、編), 282(50-53) (1997)

1996 年度実績報告書

近藤育代名古屋大学, 医学部, 講師 (40215447)