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1.細胞内Ca^<2+>動態の画像解析システムによる検索。
酵素処理により調製した腺房細胞にFura-2あるいはFluo-3を取り込ませ、細胞をカバーグラス上に固着させた後、細胞内Ca^<2+>測定システムと共焦点レーザー顕微鏡を用いて細胞内Ca^<2+>濃度([Ca^<2+>]i)の変動を観察した。カルバコール(CCh)で刺激すると1秒以内に腺腔側領域で[Ca^<2+>]iの上昇が始まり、速やかに基底側に広がった。タプシガ-ジンによる[Ca^<2+>]iの上昇には腺腔側と基底側で時間差が認められなかった。ストアの枯渇後、細胞外にCa^<2+>を添加すると主に基底側領域での[Ca^<2+>]i上昇が観察された。
2.ATPによるCa^<2+>流入の解析。
耳下腺腺房細胞をATPで刺激すると大きな[Ca^<2+>]iの上昇がみられた。この反応は細胞外Ca^<2+>を除くと消失すること、また、イノシトールリン酸生成は刺激されないことから、ATPによる[Ca^<2+>]i上昇は細胞外からのCa^<2+>の流入によることがわかった。
3.ヒト耳下腺培養細胞における細胞内Ca^<2+>ストアの分布の解析。
容量性Ca^<2+>注入は細胞内Ca^<2+>ストアの枯渇と密接に連関している。そこで画像解析システムを用いてストアの細胞内分布を調べた。その結果、核周辺部よりは細胞の辺縁部に密なCa^<2+>ストアが観察された。
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