| 研究課題/領域番号 |
07672200
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| 研究機関 | 愛知学院大学 |
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研究代表者 |
吉田 憲司 愛知学院大学, 歯学部・口腔外科学・第1講座, 助教授 (40183701)
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| 研究分担者 |
金子 道生 愛知学院大学, 歯学部・口腔外科学・第1講座, 講師 (20261026)
加藤 麦夫 愛知学院大学, 歯学部・口腔外科学・第1講座, 講師 (30214406)
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| キーワード | 低出力レーザー / 培養線維芽細胞 / 細胞増殖 / TIMP-1 / TIMP-2 |
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| 研究概要 |
Ga-Al-As半導体レーザーをヒト歯肉線維芽細胞に照射し以下の実験を行なった。
1)Gin-1細胞に対する照射条件の検討
(1)照射前後の形態学的検討
レーザー照射前後の細胞の形態学的変化を位相差顕微鏡下にて観察したところ、異常所見は認めなかった。
(2)レーザー照射の有無によるマイトジェン活性の変化について
任意に照射条件を設定し、放射活性を測定した。その結果、有意差を得たワット密度:1.12mW/cm^2,ジュール密度:0.33J/cm^2の照射条件を以下の実験に使用した。
2)細胞数の増加について
細胞数はDNA量を蛍光微量定量法で測定した。照射群では照射24、48時間後ともに、10%TIMP(-)FCS添加D-MEM培養条件下の場合、細胞数の増加に有意差を認めた。
3)TIMP-1、およびTIMP-2分泌量の測定
細胞上清のTIMP-1分泌量およびTIMP-2分泌量をサンドイッチEIAで測定した。得られたTIMPs分泌量は、DNA1μg当たりの数値とした。TIMP-1分泌量はTIMP(-)10%FCS添加D-MEM培養条件下の細胞では、24時間後に照射による有意差を認めた。TIMP-2分泌量についてはすべての条件下で測定用EIAの検出限界(10ng/ml)以下であった。
4)TIMP-1およびTIMP-2のmRNAの発現について
逆転写PCR(RT-PCR)法を用いてTIMPのmRNAの解析を行った。TIMP-1mRNAは照射2時間後にすでにmRNAの発現が、非照射群と比較して増加していた。TIMP-2mRNAについては発現量に差を認めなかった。
以上から、TIMPs系を介する機構で、低出力レーザー照射がGin-1細胞に対して、細胞増殖促進に働くことが示唆された。
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