| 研究概要 |
PFK-2/F2,6Pase(6-Phosphofructo-2-kinase/Fructose-2,6-bisphosphatase)は,解糖の律速酵素であるPhosphofructokinaseの最も強力な活性化因子であるFructose-2,6-bisphosphateの合成(PFK-2)および分解(F2,6Pase)を触媒する二機能性酵素である.哺乳動物の本二機能性酵素は各臓器で構造が異なり,肝・骨格筋型,心筋型,精巣型アイソザイムなどが報告されており,臓器特異的な遺伝子発現機構と連関した本酵素の糖代謝調節における役割の解明が期待されている.本研究では,極めて特異な臓器である胎盤の二機能性酵素はどのような構造と特性を有しているかを明らかにするため,ヒト胎盤から本酵素をクローニングすることを目的として行った.
ヒト中絶胎盤よりポリ(A)-RNAを精製し作製したcDNAライブラリーをラット精巣及びカエル骨格筋のアイソザイムcDNA断片をプローブとしてスクリーニングした結果,2種のcDNAクローンを得ることができた.これらのクローンの完全塩基配列を5'-RACE法を用いて決定し,一つのクローンは他アイソザイムとはホモロジーは高いが明らかに異なり,胎盤特異的なもの(胎盤型アイソザイム)であることを明らかとした.推定アミノ酸配列から,胎盤型アイソザイムは,肝型アイソザイムのようにN-末端部位にはPKAのリン酸化サイトを持たず,むしろ心筋型アイソザイムがそうであるようなC-末端部位にPKCのリン酸化サイトが推定された.現在,この胎盤型アイソザイムを大腸菌で発現し酵素化学的諸性質を明らかにすべく研究を進めている.
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