1996 年度実績報告書

組み換えに依存するDNA複製の機構とその生物学的意義の分子生物学的研究

研究課題

研究課題/領域番号	07680675
研究機関	東京大学
研究代表者	正井久雄東京大学, 医科学研究所, 助教授 (40229349)
キーワード	DNA複製 / DNA組み換え / 組み換え依存性修復 / DNAヘリカーゼ / Dループ / Rループ / 適応的変異 / 二重鎖DNA切断
研究概要	本年度は、PriAタンパク質による、D-loopあるいはR-loopからの複製開始機構を分子レベルで解析するための第1歩としてPriAタンパク質に依存するin vitroDNA複製系の開発を試みた。PriA欠損株からの抽出液を作製し、この中ではφX174ファージDNA及び、ColE1型プラスミドは複製できないが、精製したPriAタンパク質の添加により効率よく複製されることを確かめた。次に、in vitroで作製したR-loopを鋳型に用いて同様にPriA依存性の複製が観察されるかどうかを検討した。しかしながら、現在までのところPriAに依存した顕著なDNA複製は観察されていない。今後、ColE1型プラスミドの複製起点に形成されるR-loop構造や、RecAタンパク質を用いてin vitroで作製したD-loop構造をも鋳型を用いて、検討していく予定である。また、φX174ファージ型の複製に要求されるDnaT、PriB、DnaB、DnaCといったプレプライミングタンパク質を精製し、再構成in vitro系を用いた解析を試みる予定である。データベースの検索により少なくとも6種類の細菌に、PriA類似タンパク質を見い出した。この中には、マイコプラズマに見い出された遺伝子のように、Zinc Finger構造は維持しているが、ヘリカーゼドメインの一部は失っているものがあり、興味深い。出芽酵母も含む真核細胞においてもpriAに類似したヘリカーゼを検索したが、これまでのところ特に類似した遺伝子は見い出されていない。今後、より機能的なアッセイ系を用いた検索、あるいは遺伝学的なスクリーニングを行い、真核細胞のPriAホモログを検索していく予定である。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Masai,H.& Arai,K.: "DnaA-dependent assembly of the ABC Primosome at the Asite,a single-stranded DNA hairpin contaimiy a dnaA box" Eur.J.Biochem.230. 384-395 (1995)
[文献書誌] Masai,H.et.al.: "hskit,a Schizosaccharomyces pombe geve related to Saccharomyces cerevisiae CDC7,is requied for DNA replicatfion" EMBO J.14. 3094-3104 (1995)
[文献書誌] 正井久雄: "組み換えに依存したDNA複製の機構と生物学的意義" 実験医学増刊. 13. 1271-1277 (1995)
[文献書誌] Masai,H.& Arai,K.: "DnaA-and PriA-dependent primosomoes:two distinct replication complexes for replication of Eschericlna cti duromsome" Frontiers in Bioscience. 1. 49-58 (1996)
[文献書誌] Ikeda,M.et al: "A fusion protein library:an improved method for rapid screening and characterization of DNA binding or interacting proteins" Gene. 181. 167-171 (1996)
[文献書誌] Ikeda,M.et al: "CTBP-1/RBP-1 of Saccharomyces cerevisiae protein which binds to T-rich singlestranded DNA containing the 11 base-pair core sequence of autonomously replicating sequence,is a polydeoxypyrimidine binding protein" Eur.J.Biochem.238. 38-47 (1996)
[文献書誌] Masai,H: "Mechanisms of Primer RNA Synthesis" Biochimie. (in press).

1996 年度 実績報告書

組み換えに依存するDNA複製の機構とその生物学的意義の分子生物学的研究

研究代表者

正井 久雄 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (40229349)

研究成果

[文献書誌] Masai,H.& Arai,K.: "DnaA-dependent assembly of the ABC Primosome at the Asite,a single-stranded DNA hairpin contaimiy a dnaA box" Eur.J.Biochem.230. 384-395 (1995)

[文献書誌] Masai,H.et.al.: "hskit,a Schizosaccharomyces pombe geve related to Saccharomyces cerevisiae CDC7,is requied for DNA replicatfion" EMBO J.14. 3094-3104 (1995)

[文献書誌] 正井久雄: "組み換えに依存したDNA複製の機構と生物学的意義" 実験医学 増刊. 13. 1271-1277 (1995)

[文献書誌] Masai,H.& Arai,K.: "DnaA-and PriA-dependent primosomoes:two distinct replication complexes for replication of Eschericlna cti duromsome" Frontiers in Bioscience. 1. 49-58 (1996)

[文献書誌] Ikeda,M.et al: "A fusion protein library:an improved method for rapid screening and characterization of DNA binding or interacting proteins" Gene. 181. 167-171 (1996)

[文献書誌] Ikeda,M.et al: "CTBP-1/RBP-1 of Saccharomyces cerevisiae protein which binds to T-rich singlestranded DNA containing the 11 base-pair core sequence of autonomously replicating sequence,is a polydeoxypyrimidine binding protein" Eur.J.Biochem.238. 38-47 (1996)

[文献書誌] Masai,H: "Mechanisms of Primer RNA Synthesis" Biochimie. (in press).

1996 年度実績報告書

正井久雄東京大学, 医科学研究所, 助教授 (40229349)

[文献書誌] 正井久雄: "組み換えに依存したDNA複製の機構と生物学的意義" 実験医学増刊. 13. 1271-1277 (1995)