| 研究概要 |
本研究は,造血系細胞におけるインスリン刺激依存性の非受容体型チロシンキナーゼp72^<syk>の活性化機構とその生理的機能を解明することを目的とし,本年度はB細胞株IM 9 cellsにおけるインスリン刺激による非受容体型チロシンキナーゼp72^<syk>の活性化機構の解析を行っている。
その結果,抗syk抗体を用いた解析から,非受容体型チロシンキナーゼp72^<syk>がB細胞株IM 9 cellsに存在し,Immunoprecipitation kinase assay法でInsulin刺後15secでチロシンリン酸化活性の増加が認められ,30secから1minで最大活性を示し,2min以後徐々に低下することが認められた。そのリン酸化活性はInsulinの濃度依存性に活性化し,KOH処理により,その増加したリン酸化活性はチロシン残基によるものであることが確認されている。その活性化機構として,Insulin receptorとp72^<syk>が直接的なあるいは間接的なassociationを介しているか否かが重要な課題となっており,各種抗体を用いて解析を進めている。現在抗syk抗体での免疫沈降物中には95KDaあたりのチロシンリン酸化蛋白質バンドが一応確認されるので,Insulin receptorとp72^<syk>が直接associationしている可能性が考えられ、それを裏づける実験データーを検討中である。
また最近,Insulin receptorのNPEY motifのTyr-950のチロシン残基がadaptor proteinであるSHCおよびInsulin receptor kinaseの基質であるInsulin receptor substrate2(IRS-2)と同じsiteで結合していることが報告されており,現在Insulin receptorを介したp72^<syk>とSHCとの相互作用について解析中である。
なお,H_2O_2刺激によってInsulin作用がmimicされることが知られており,p72^<syk>もまたH_2O_2刺激によって顕著に活性化されることもB細胞で一応確認しているので,IM-9 cellsにおけるInsulin刺激あるいはH_2O_2刺激によるp72^<syk>の活性化を接点とした反応機構についても,同時に検討中である。
|
