パラミクソウイルス遺伝子転写複合体構成タンパクの発現と機能

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07680736
• 研究機関: 近畿大学
• 研究代表者: 松村 治雄 近畿大学, 医学部, 助手 (10229536)
• キーワード: RNA editing / polymerase / transcription / replication / phosphoprotein / baculovirus / nucleocapsid

研究概要

1.RNA editingの解析に関しては、HPIV2のPおよびV遺伝子、さらにediting siteのG塩基の連続した部分(Gクラスター)を長くしたV遺伝子を発現するrecombinant baculovirus(rBV)を作製し、その感染昆虫細胞における蛋白合成およびmRNA合成を解析した。その結果、(1)V蛋白を発現するように構築したrBV感染昆虫細胞ではV蛋白のみならずP蛋白も検出された。(2)V gene cDNAからin vitro転写により合成したVmRNAをウサギreticulocyte lysateにより翻訳させるとV蛋白のみが合成されるが、V蛋白を発現するように構築したrBV感染昆虫細胞からのmRNAを用いて同様に翻訳させるとV蛋白のみならずP蛋白も検出された。(3)V蛋白を発現するように構築したrBV感染昆虫細胞からのmRNAにはP蛋白をcodeするedited mRNAが検出された。すなわち、V遺伝子のediting siteのG塩基にG塩基の付加または欠失が検出された。これらの結果は、V蛋白を発現するように構築したrBV感染昆虫細胞においてはRNA editing様の現象(すなわちG塩基の挿入または欠失)が見られることを示している。また、editing siteのGクラスターのGの数を多くした方がこのRNA editing様現象の程度が高かったので、Gクラスターの長さがRNA editingに重要であることが示唆された。また、これらの結果はパラミクソウイルスのRNA editingに類似した現象が、パラミクソウイルスのRNAポリメラーゼの非存在下でも起こることを初めて明らかにしたものである。
2.転写複製系の再構成に関しては、NPおよびL遺伝子全長を動物細胞発現ベクターに構築し、動物細胞にて発現を確認した。さらに、NP遺伝子発現細胞においてNP蛋白はrecombinant P蛋白及びrecombinant V蛋白との結合に関しては機能的に発現していることを確認した。しかし、NPおよびL遺伝子を組み込んだトランスファーベクターを作成したが、rBVの作成には現在のところ成功していない。

研究成果

• [文献書誌] Watanabe,N.: "Identification of the sequences responsible for nuclear targeting of the V protein of human parainfluenza virus type 2." J.Gen.Virol.77. 327-338 (1995)
• [文献書誌] Nishio,M.: "Interaction between nucleocapsid protein (NP)and phosphoprotein (P) of human parainfluenza virus type 2" J.Gen.Virol.77. 2457-2463 (1996)
• [文献書誌] Watanabe,N.: "Binding of the V proteins to the nucleocapsid proteins of human parainfluenza type 2 virus." Med.Microbiol.Immunol.185. 89-94 (1996)
• [文献書誌] Mao,X.: "Characterization of Bangor virus proteins by using monoclonal antibodies." Avian Dis.40. 150-157 (1996)
• [文献書誌] Nishio,M.: "Human parainfluenza virus type2 phosphoprotein:mapping of monoclonal antibodies and location of the multimerization domain." J.Gen.Virol.78. 1303-1308 (1997)