卵成熟促進因子の形成・活性化機構

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07680792
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 山下 正兼 北海道大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (30202378)
• キーワード: cdc2 / サイクリンB / MPF / 魚類 / 両生類 / 卵成熟 / mRNA結合タンパク質 / 減数分裂

研究概要

1卵成熟誘起ホルモン刺激によるサイクリンB合成開始の分子機構
キンギョ卵成熟誘起に必須のサイクリンBmRNA翻訳開始機構を探る第一歩として、インビトロで作製したキンギョサイクリンBmRNA、cdc2mRNA、アクチンmRNAをプローブに、ノースウエスタン法、UVクロスリンク法、ビオチン標識RNAアフィニティー法により、サイクリンBmRNAに特異的に結合するタンパク質の検索を行った。その結果、サイクリンBmRNAに特異的に結合するタンパク質は発見できなかったが、約90、50、35kDaのRNA結合タンパク質が発見された。今後、これらを精製し、そのアミノ酸配列の一部を決定し、cDNAクローニングを行う計画である。
2ツメガエル以外の両生類における卵成熟促進因子(MPF)の形成・活性化機構
アカガエルサイクリンB1、B2に対する抗体を作製し、卵成熟過程におけるこれらタンパク質の挙動を調べた。その結果、サイクリンB1は未成熟卵に存在せず、サイクリンB2は存在したが、cdc2と複合体を形成していなかった。つまり、キンギョと同様、アカガエル未成熟卵にはpre-MPFは存在せず、ホルモン刺激後cdc2とサイクリンBの複合体(MPF)が形成された。しかし、キンギョと異なり、ツメガエルと同様、MPFの活性化はバナデ-トや抗cdc25抗体で阻害された。これらのことは、アカガエルはキンギョとツメガエルの中間的なMPF形成・活性化機構を採用していることを示す。

研究成果

• [文献書誌] Naito,Kunihiko他7名: "Association of p34^<cdc2> and cyclin B1 during meiotic maturation in porcine oocytes." Developmental Biology. 168. 627-634 (1995)
• [文献書誌] Katsu,Yoshinao他5名: "Molecular cloning and immunological analysis of goldfish cyclin A during oocyte maturation." Developmental Biology. 170. 616-625 (1995)
• [文献書誌] Tanaka,Toyomi他1名: "Pre-MPF is absent in immature oocytes of fishes and amphibians except Xenopus." Development,Growth & Differentiation. 37. 387-393 (1995)
• [文献書誌] Tokumoto,Toshinobu他4名: "Purification of latent proteasome(20S proteasome)and demonstration of active proteasome in goldfish(Carassius auratus)oocyte cytosol." Biomedical Research. 16. 173-186 (1995)
• [文献書誌] Tokumoto,Toshinobu他4名: "Purification and characterization of active proteasome(26S proteasome)from goldfish ovaries." Biomedical Research. 16. 207-218 (1995)
• [文献書誌] Yoshida,Noriyuki他2名: "Changes in phosphorylation activities during goldfish and Xenopus oocyte maturation." Zoological Science. 12. 599-606 (1995)