明暗変化に伴うラット網膜のCREBの遺伝子活性化機構

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07680831
• 研究機関: 日本医科大学
• 研究代表者: 今城 純子 日本医科大学, 医学部, 講師 (20223323)
• キーワード: 網膜 / CREB / in situ hybridization / c-fos mRNA / 免疫染色 / リン酸化 / ラット / カルシウム イオン

研究概要

本研究では網膜において、CREBが明暗変化でどのような様式で、燐酸化されていくのかを抗燐酸化CREB抗体を用い、免疫染色とウエスタンブロットを行なった。暗期には抗燐酸化CREB抗体を用いた免疫染色によって染色されなかった。また、ウエスタンブロットにおいても検出できなかった。以上より暗期にはCREBは燐酸化されていないことが明かとされた。さらに、明期に変化した後、20秒、1分、5分、のラット網膜を採取して、免疫染色とウエスタンブロットを行なったところ、1分をピークとして燐酸化CREBが検出され、明暗の変化により、つまり光が刺激として、CREBが燐酸化されることが明かとなった。
次に、Caイオンの流入がc-fos mRNAや、燐酸化CREBの発現にどのような影響を及ぼすかを、Caチャンネルアゴニストやブロッカーを投与したラットを用い、in situ hybridization法によりc-fos mRNAの発現を観察した。Caチャンネルアゴニスト投与後45分後にc-fos mRNAの発現や、CREBの燐酸化にピークが見られ、網膜においてもCaイオンの流入がc-fos mRNAの発現や、CREBの燐酸化に必須であるということが明かとなった。今後はCaイオンの流入から、CREBの燐酸化の間にどのような細胞内情包伝達系の経路が存在するかの検討をする予定である。

研究成果

• [文献書誌] Harada,T: "Cone-associated c-fos gene expression in the light-damaged rat retinal" Invest.Ophtalmol Visual Sci. 37. 1250-1255 (1996)
• [文献書誌] Ohki,K.: "c-fosgene expression in postnatal rat retinal with light/dark cycle" Vision Res. 36. 1883-1886 (1996)
• [文献書誌] Imaki,J.: "Expression of jun family genes in rat retinal cells regulation by light/dark cycle" Molecular Brain Research. 30. 48-52 (1995)
• [文献書誌] Ohki,K.: "NITRIC OXIDE SYNTHASE ACTIVITY AND EXPRESSION IN RETINAL CAPILLARY ENDOTHELIAL CELLS AND PERICYTES" Current Eye Research. 14. 1021-1024 (1995)
• [文献書誌] Yoshida,K.: "Differential distribution of CaM kinases and induction of c-fos expression by flashing and sustained light in rat retinal cells" Investigative Opthalmology & Visual Science. 37. 174-179 (1996)
• [文献書誌] Yoshida,K.: "Light-Induced CREB phosphorylation and gene expression in rat retinal cells" Journal of Neurochemistry. 65. 1499-1504 (1995)
• [文献書誌] Hagiwara,M.: "Intracellular Signal Transduction" Academic Press Inc., 310 (1996)