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中枢神経および末梢神経系、PC12細胞での発生・分化過程におけるユビキチン(Ub)の出現を免疫組織化学法を用いて、これまでに調べたところ、神経系においては種々の部位で発生の異なる時期に一過性に細胞核内のUbが増加すること、PC12細胞においてもNGF添加後一定の日数を経て核内にUbが増加することが明らかになった。これらの結果は、Ubが神経細胞核内で発生・分化の過程に何らかの役割を担っていることを示唆する。
また、これまでの解析から核内で増加するUbは、遊離型ではなく、Ub結合蛋白質であることが、EIAの結果などからわかっている。そこで、本年度は、PC12細胞核内に、NGFにより増加するUb化蛋白質がどのような分子量であるかを、ウェスタン解析法により調べた。
方法としては、NGF添加群と対照群から、核を集め、水溶性核分画と尿素溶性核分画に分け、ウェスタン解析法によりUb化蛋白質を調べた。その結果、NGFにより、水溶性核抽出液中の高分子量Ub化蛋白質が増加することがわかった。一方、尿素溶性核抽出液中のUb化蛋白質には、NGFによる一定の傾向は認められなかった。以上の結果から、NGF添加によりPC12細胞の神経分化が誘導される時に、細胞核内の水溶性の高分子量Ub化蛋白質が増加していることがわかった。このことから、神経分化過程に、核蛋白質のユビキチン蛋白分解系に何らかの変化が生じることが明らかとなった。
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