研究概要 |
1)ラット坐骨神経挫滅後のPLA2の発現・経時的推移:成熟Long-Evansラットの坐骨神経を機械的に挫滅後1,3,5,7,14,21日目に取り出し、OCT compoundを用いて凍結固定した。クリオスタットで8um切片を作成し、(1)OX-42(ラットMac-1、マクロファージを認識)、(2)PLA2に対するポリクローナル・モノクローナル抗体を用いて、Vectastain ABC-Elite kitにより免疫染色を行なった。その結果、マクロファージと思われる細胞の一部がPLA2が陽性であった。2)培養シュワン細胞・マクロファージによるPLA2の産生・分泌:シュワン細胞は生後2日目のLong-EvansラットからでAra-C処理(Brocksらの方法)によって95%以上の純度で10%FBS加DMEMで培養された。マクロファージは非処理あるいは3%thioglycollateを腹腔内投与後に腹腔内から採取し、10%FBS加DMEMで培養された。培養シュワン細胞に対してこれまで他の細胞でPLA2酵素を誘導することが知られている、種々サイトカイン(IL 1,tumor necrosis factor(TNF)など)を投与して、PLA2の発現、産生・分泌を調べた結果、forskolin+TNF刺激で細胞内PLA2の発現が促進される傾向がみられた。
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