1995 年度実績報告書

変異p53と活性rasにより悪性転換したラット細胞からの高転移クローンの樹立

研究課題

研究課題/領域番号	07770177
研究機関	(財)東京都臨床医学総合研究所
研究代表者	矢ノ下玲財団法人東京都臨床医学総合研究所, 腫瘍生化学研究部門, 研究員 (00224915)
キーワード	ミスセンス変異p53cDNA / 活性H-ras遺伝子 / REF / 転移能 / ゼラチナーゼ
研究概要	癌の転移には原発巣からの遊離、基底膜への接着、破壊の過程が必須であり、これにはマトリックスメタロプロテアーゼ等種々のプロテアーゼの関与が明らかにされつつあるが、詳細は不明である。転移機構の解明には高転移クローンを得て転移性のない細胞との間でプロテアーゼ活性や遺伝子発現を比較することも役立つと考えられる。一方、我々はヒト大腸癌の発生過程において、p53遺伝子の突然変異と対立遺伝子欠失が腺腫から早期癌への転換に重要であること、変異は殆どがミスセンス変異であり6つのホットスポットがあることを既に報告した。そしてこれらのホットスポットに含まれるミスセンス変異p53cDNAを作製し、活性H-ras遺伝子(pSK2, pHs49)と共に初代培養ラット胎児細胞(REF)に導入し、出現した形質転換体フォーカスからヌードマウス皮下での造腫瘍性を有する形質転換クローンを6種(238Arg/pSK2、245Ser/pSK2、245Asp/pSK2、245Asp/pHs49、248Trp/pSK2、273Cys/pHs49)樹立している。これらの転移能を調べるためヌードマウス皮下および尾静脈から移植したところ、6つのクローンすべてが肺へ転移することが認められた。6つのクローンのうち5つはDNA aneuploidyを示しており、変異p53の導入が何らかの遺伝子変化を引き起こし、REFが転移能を獲得したと予想された。また、ゼラチンザイモグラフィーにより6つのクローンは92kDゼラチナーゼ活性を培養上清中に放出することが認められたが、元のREFでは認められなかった。形質転換クローンの転移能に92kDゼラチナーゼ活性が関与していると考えられる。今後さらにこの転移能の獲得に関連する遺伝子変化等を解析する。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Rei Kikuchi-Yanoshita: "Malignant transformation of rat embryo fibroblasts by cotransfection with eleven mutant p53 cDNAs and activated H-ras gene." Oncogene. 11. 1339-1345 (1995)
[文献書誌] Michiko Miyaki: "Familial polyposis: recent advances." Critic. Rev. Oncol. /Hematol.19. 1-31 (1995)
[文献書誌] Michiko Miyaki: "Germ line mutations of hMSH2 and hMLH1 genes in Japanese families with HNPCC: usefullness of DNA analysis for screening and diagnosis of HNPCC patients." J. Mol. Med.73. 515-520 (1995)
[文献書誌] Michiko Miyaki: "Increased cell-substratum adhesion, and decreased gelatinase secretion and cell growth, induced by E-cadherin transfection of human colon carcinoma cells." Oncogene. 11. 2547-2552 (1995)
[文献書誌] Kiyoko Tanaka: "Suppression of tumorigenicity and invasiveness of colon carcinoma cells by introduction of normal chromosome 8p12-pter." Oncogene. 12. 405-410 (1996)
[文献書誌] Masatoshi Muraoka: "p300 gene alterations in colorectal and gastric carcinomas." Oncogene. 12. (in press) (1996)
[文献書誌] 矢ノ下玲: "悪性腫瘍とp53、病理と臨床、『病理診断と分子生物学・遺伝学』" 文光堂 (編集;秦順一、深山正久、野村慎太郎)(印刷中), (1996)

1995 年度 実績報告書

変異p53と活性rasにより悪性転換したラット細胞からの高転移クローンの樹立

研究代表者

矢ノ下 玲 財団法人東京都臨床医学総合研究所, 腫瘍生化学研究部門, 研究員 (00224915)

研究成果

[文献書誌] Rei Kikuchi-Yanoshita: "Malignant transformation of rat embryo fibroblasts by cotransfection with eleven mutant p53 cDNAs and activated H-ras gene." Oncogene. 11. 1339-1345 (1995)

[文献書誌] Michiko Miyaki: "Familial polyposis: recent advances." Critic. Rev. Oncol. /Hematol.19. 1-31 (1995)

[文献書誌] Michiko Miyaki: "Germ line mutations of hMSH2 and hMLH1 genes in Japanese families with HNPCC: usefullness of DNA analysis for screening and diagnosis of HNPCC patients." J. Mol. Med.73. 515-520 (1995)

[文献書誌] Michiko Miyaki: "Increased cell-substratum adhesion, and decreased gelatinase secretion and cell growth, induced by E-cadherin transfection of human colon carcinoma cells." Oncogene. 11. 2547-2552 (1995)

[文献書誌] Kiyoko Tanaka: "Suppression of tumorigenicity and invasiveness of colon carcinoma cells by introduction of normal chromosome 8p12-pter." Oncogene. 12. 405-410 (1996)

[文献書誌] Masatoshi Muraoka: "p300 gene alterations in colorectal and gastric carcinomas." Oncogene. 12. (in press) (1996)

[文献書誌] 矢ノ下 玲: "悪性腫瘍とp53、病理と臨床、『病理診断と分子生物学・遺伝学』" 文光堂 (編集;秦順一、深山正久、野村慎太郎)(印刷中), (1996)

1995 年度実績報告書

矢ノ下玲財団法人東京都臨床医学総合研究所, 腫瘍生化学研究部門, 研究員 (00224915)

[文献書誌] 矢ノ下玲: "悪性腫瘍とp53、病理と臨床、『病理診断と分子生物学・遺伝学』" 文光堂 (編集;秦順一、深山正久、野村慎太郎)(印刷中), (1996)