肝臓特異的サイトカイン発現トランスジェニックマウスの作製とその解析

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07770236
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 原田 明久 金沢大学, 医学部, 助手 (00228636)
• キーワード: サイトカイン / トランスジェニック / 肝臓 / 炎症 / L-セレクチン / 好中球

研究概要

好中球走化活性化因子interleukin-8(IL-8)はin vitroにて好中球、好塩基球、T細胞に対し強い走化活性を示すとともに、in vivoにて好中球依存性急性炎症における組織損傷に対して重要な役割を担っていることがわかっている。本研究において、IL-8をマウスを用いて特定のある臓器に特異的に過剰に発現させた場合、それが炎症性の疾患モデルとしての病態を呈することを想定し、tissue-specific(臓器特異的)、特に肝特異的なIL-8の発現マウス(IL-8 Tg)の作製とその解析を行った。
導入遺伝子はマウス肝臓に特異的にサイトカインを発現させるために血清アミロイドP遺伝子(serum amyloid P component gene)のプロモーターを利用し(熊本大学、山村研より供与)、この下流にヒトIL-8cDNAを挿入し、これをマウス受精卵前核にマイクロマニピュレーターを用いて導入した。IL-8 TgはNo.53とNo.56の2系統を樹立した。ともにヒトIL-8をプローブにしたsouthern blotting(EcoRI処理)にて、約250bp付近にてシングルバンドを認め、northern blottingにて、肝臓特異的にヒトIL-8のmRNAの発現が認められた。
また、血清中のヒトIL-8量は4.0-10ng/mlに達し、末梢血白血球数はコントロールマウスと比較して有意の上昇を認めた(p<0.05)。好中球の割合もコントロールに比較して増加していた。末梢血白血球上の表面抗原(B220,CD3,Mac-1,Gr-1,ER,ERHi)はIL-8 Tgとコントロールにおいて明らかな差は見られなかった。しかし、末梢血好中球表面上のL-selectinはIL-8 Tgにおいてdownregulationが認められた。さらに、好中球表面上のmouse IL-8 receptorの発現はIL-8 Tgとコントロールにおいて差は認めなかった。病理組織学的にはIL-8 Tgの肝臓においてコントロールよりも好中球を散見できるものの明らかな好中球浸潤による組織破壊は認めなかった。

研究成果

• [文献書誌] Fujioka,N.: "Preparation of specific antibodies against murine IL-1 receptor antagonist(IL-1 ra)and the establishment of IL-1 ra as an endogeneous regulator of bacteria-induced fulminant hepatitis in mice." J. Leukocyte Biology. 58. 90-98 (1995)
• [文献書誌] Zhang,Y.: "Tumor necrosis factor(TNF)is a physiological regulator of hematopoietic progenitor cells: increase of early hematopoietic progenitor cells in TNF receptor p55-deficient mice in vivo and potent inhibition of progenitor cell proliferation by TNFa in vitro" Blood. 86. 2930-2937 (1995)
• [文献書誌] Watanabe,S.-i.: "Prevention of endotoxin shock by an antibody against leukocyte integrin b2 through inhibiting production and action of tumor necrosis factor." Int. Immunol. 7. 1037-1046 (1995)
• [文献書誌] Christian G.Larsen,: "The delayed-type hypersensitivity reaction is dependent on IL-8: Inhibition of a tuberculin skin reaction by an anti-IL-8 monoclonal antibody" J. Immunol. 155. 2151-2157 (1995)
• [文献書誌] Harada,A.: "The biological,biochemical and molecular profile of leukocyte chemotactic and activating cytokine, interleukin-8.Growth Factors and Cytokines in Health and Disease." LeRoith, D.,and Bondy, C. eds, 20 (1996)
• [文献書誌] Harada,A.: "Use of blocking antibodies as probes for in vivo functions of chemokines.ImmunoMethods in Chemokine:characterization and Activity." Sozzani,S.,and Mantovani,A.eds, 15 (1996)