抗トポイソメラーゼI抗体の生産機序を中心とした全身性強皮症病因の解明

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07770348
• 研究機関: 聖マリアンナ医科大学
• 研究代表者: 加藤 智啓 聖マリアンナ医科大学, 難病治療研究センター, 助手 (80233807)
• キーワード: トポイソメラーゼI / MHCクラスII / T細胞エピトープ

研究概要

全身性強皮症では、抗トポイソメラーゼI(トポI)抗体の出現が特徴である。我々は以前の研究から抗トポI抗体産生機序としてantigen-driven、すなわち、トポI特異的自己T細胞が活性化されていることを見つけている。本研究ではトポI特異的T細胞の活性化メカニズムを明らかにする目的で患者で実際に認識されるトポIのT細胞エピトープを決定とマウスでのシュミレーション実験を計画した。重要な作業はT細胞エピトープを詳細に決めることであるが、トポI分子が大きく、全長を網羅するペプチドを化学合成するという方法をとりづらく、ランダムライブラリーの原理をトポI分子に応用し、MHCクラスII分子に結合する領域を同定することとした。MHCクラスII分子は精製でなく、組換えMHCクラスII分子を大腸菌で大量産生させることとし、α鎖及びβ鎖の細胞外ドメインの遺伝子をPCR法にて増幅した後、リンカー(DDAKK)4をコードする遺伝子(作成法は報告済み)を挟んで一本鎖にして、ファージのマイナ-コートプロテインをコードする遺伝子に連結した。これに先立ち試験的にMHC分子と同じスーパーイムノグロブリンファミリーである抗体分子の可変領域であるVH鎖とVL鎖を同じリンカーを挟んで一本鎖として発現させ、抗体活性があることを確認している(Mol. Biol. Reports, in press)。MHCクラスII分子はファージ上に発現され、現在本来の立体構造を保持しているか抗クラスII抗体などを用い確認中である。一方、トポIの様々な部分を長さ30-50アミノ酸程度のペプチドとして発現するファージライブラリーはすでに完成しており、組換えMHCクラスII分子が作成され次第スクリーニングを行うことができる。

研究成果

• [文献書誌] Yamamoto K., Masuko K., Takahashi S., Ikeda Y., Kato T., Mizushima Y., Hayashi K., Nishioka K.: "Accumulation of distinct T cell clonotypes in human solid tumors." J. Immunol.154. 1804-1809 (1995)
• [文献書誌] Ikeda Y, Masuko K, Nakai Y, Kato T, Hasunuma T, Yoshino S, Mizushima Y, Nishioka K, Yamamoto K.: "High frequencies of identical T cell clono-types in synovial tissues of rheumatoid arthritis patients suggest the occur-rence of common antigen-driven immune responses" Arthritis Rheum.(1996)
• [文献書誌] Masuko, K., Kato, T., Hagihara, M., Tsuchida, F., Takemoto, Y., Izawa, K., Kato, T., Yamamoro, S., Mizushima, Y., Nishioka, K., Tsuji, K., Yamamoto,K.: "Stable clonal expansion of T cell induced by bonemarrow transplantation" Blood.87. 789-799 (1996)
• [文献書誌] Komagata Y., Masuko K., Tashiro F., Kato T., Ikuta K., Nishioka K., Ito K., Miyazaki J., Yamamoto K.: "Clonal Prevalence of T cells infiltraing into the pancreas of prediabetic NOD mice" Int. Immunol. (in press).
• [文献書誌] T. Hoger, M. Tokuyama, K. Yonamine, K. Hayashi, K. Masuko-Hongo, Tomohiro Kato, T. Kobata, Y. Mizushima, K. Nishioka, K. Yamamoto: "Time course analysis of α+β+T cell clones during normal pregnancy" Eur. J. Immunol.(in press).
• [文献書誌] Tomohiro Kato, Y.Ikeda, Z-P Zong, H. Sasakawa, M. Kurokawa, K. Masuko, R. Igarashi, Y. Nizushima, K. Nishioka, K. Yamamoto: "Charactrerization of T cell receptor β chains of accumulating T cells in skin allografts in mice" Transplantation. (in press).
• [文献書誌] 加藤 智啓: "分子レベルの自己免疫疾患" 山本一彦, 15 (1995)
• [文献書誌] 加藤 智啓: "疾患別最新処方" 矢崎義雄, 2 (1995)