| 研究概要 |
1.我々が樹立した慢性関節リウマチ患者滑膜細胞株(E11)は、IL-1,PMA刺激にて増殖が促進され、蛋白およびmRNAレベルでIL-1β,IL-6を発現した。また、Human T cell leukemia virus tax productを遺伝子導入しE11に発現させる事でIL-1β,IL-6の産生が生じた。
2.E11におけるIL-1α或いはPMAで刺激した時のIL-1β遺伝子転写活性化に重要な調節遺伝子領域は,転写開始より約3000bp上流に存在する約400bpの領域であった。
3.この領域の遺伝子塩基配列を検索するAP-1,NFκB,NFIL-6結合配列が各々2カ所ずつCREBが1カ所存在した。このうち上流位のAP-1結合部位のdeletionは著しくCAT活性の低下をもたらした。また、バンドシフトアッセイにて同部位へのAP-1蛋白の結合を確認した。
4.一方、HTLV-1 tax productはIL-1β遺伝子転写開始部より約500bp上流、IL-6では近位プロモーター領域に作用しトランス活性を持つ事を明らかにしたが、deletionによる検討の結果同部位に存在するNFκB結合配列がこのトランス活性に不可欠であることが解明された。
5.変形性関節症(Osteoarthritis:OA)滑膜及びRA滑膜より細胞核蛋白を抽出しNFκB結合配列をもつoligonucleotidesをprobeとしてバンドシフトアッセイをしたところ、RA核蛋白ではOA由来のものに比して強いバンドが検出された。
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