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我々はrasがん遺伝子産物(Ras)がシステイン・プロテアーゼを直接阻害することを発見した。そこで本研究はRasのこの活性が発がんに関与しているかどうかを明らかにすることを目的として次のようなプローブを用いて行なわれた。(1)Rasと同様にシステイン・プロテアーゼ阻害活性を持つがGTP-結合活性を持たない可溶性蛋白質、シスタチン、(2)シスタチンのC-末端にRas蛋白質のCAAXモチーフを結合させたシスタチン-CVLS、(3)Ras蛋白質のアミノ酸42番目から49番目が欠損した変異体、RasΔ42-49。この変異体はGTP-結合活性やRaf-1-結合活性が欠損しているがシステイン・プロテアーゼ阻害活性は野生型のそれらと同程度である。これらの蛋白質の遺伝子をNIH3T3細胞に導入し、トランスフェクト細胞を単離した。導入された遺伝子の発現はデキサメサゾンの処理により誘導された。そこでデキサメサゾン存在下で軟寒天中のコロニー形成能を測定した。すると1〜3の遺伝子の発現のみではトランスフォームしなかった。ところが発がんプロモーター、TPAの存在下で2および3の遺伝子を発現すると高いコロニー形成率が観察され、基質非依存性にトランスフォームしたことが判明した。1の遺伝子は中程度のコロニー形成率を示した。これらのことから、システイン・プロテアーゼを阻害することによって発がんの初期の変化が誘導されると推定された。
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