本研究では、内臓が左右逆転したメダカ突然変異体abecobeの原因遺伝子を解析することによって、左右性形成機構の解明を目指している。本年度は以下のことを明らかにした。 ・MOによるノックダウン実験 abecobe遺伝子のMOによるノックダウンを行い、abecobeと同様の表現型が生じることを確認した。これにより、abecobe遺伝子がabecobe変異体の原因遺伝子であることの確証を増すことができた。 ・allele解析 abecobeのalleleを単離し、abecobe遺伝子の配列を野生型と比較した。その結果、abecobeとは異なる部位に変異が生じていることを確認した。これにより、abecobe遺伝子がabecbbe変異体の原因遺伝子であることの確証を増すことができた。 ・RT-PCR 成魚の各器官からcDNAを作製、abecobe遺伝子特異的なプライマーでRT-PCRを行い、abecobe遺伝子の発現部位を調べた。その結果、ユビキタスな発現が見られ、特に卵巣、肝臓で強い発現が観察された。これにより、abecobe遺伝子の空間的な発現パターンを理解することができた。 ・in situ hybridization abecobe遺伝子のプローブを作製し、野生型体節期胚でin situ hybridizationを行った。その結果、abecobe 遺伝子はクッペル胞特異的に左右対称に発現していることを確認した。また、その発現はO体節期で最も強く、以降9体節期まで減少していった。これにより、abecobe遺伝子の時間的・空間的な発現パターンを理解することができた。
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