研究課題
国際学術研究
アルコール依存症の動物モデルでの研究は広く行われているが、今回、我々はモデルとして培養神経細胞を用いた。エタノール(EtOH)は種々のレセプターなどに作用し、複数のシグナル伝達経路に影響を及ぼすが、培養細胞の場合、各経路への影響や関与する分子の解析が容易となる。またレセプターcDNAを細胞に導入することで、薬物依存の形成に関与していると思われるレセプターと、EtOHとの相互作用の解析も可能となる。まず、我々はレセプター発現用のウイルスプロモーターのEtOHによる影響を検討した。3種類のウイルスプロモーターを用い、レセプターのリガンドとの結合やCATアッセイでEtOHの慢性投与の影響を評価した。一時的にCATを発現させた場合、慢性EtOH刺激はどのプロモーターでもCAT活性を上昇させたが、cDNAが安定に発現するクローンでは、慢性EtOH刺激によるプロモーター活性の変化は、クローン間で著しい差があった。このことは、EtOHによるプロモーター活性の変化が、付近のシスエレメントによって影響を受けることを示す。次に、上記の実験で選択されたクローンを用いて、慢性EtOH刺激によるA_1及びA_2レセプターのcAMP産生に対する影響を検討した。その結果、A_1レセプターは、A_2レセプターと違い、慢性EtOH投与による脱感作を受けないことが明らかとなった。次いで、EtOHのシグナル伝達系に対する関与をさらに明らかにするために、プロテインキナーゼの細胞内局在の変化を検討した。慢性EtOH投与は、細胞質内に局在するAキナーゼを核内に移動させた。核内に移動したAキナーゼは、CREBなどの種々の転写因子を活性化すると考えられ、このことが、細胞へのEtOHの多彩な影響を説明する現象の一つと考えられる。また、Cキナーゼのあるアイソザイムは、核周囲に存在していたが、EtOH刺激により細胞質へ移動した。他の乱用薬物のレセプターを刺激した時も、Cキナーゼは同じ挙動を示したことから、この現象は、複数の乱用薬物に共通する重要な現象と考えられ、今後Cキナーゼの細胞内局在の変化を中心に研究を進める予定である。
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