ライム病の地域特性、並びに防疫指針と国際監視システムの確立

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08044310
• 研究機関: 静岡県立大学
• 研究代表者: 柳原 保武 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (30046255)
• 研究分担者: BERGSTROM S スェーデン, ウメーオ大学・医学部, 教授 ; SIMON M.M. ドイツ, マックス・ブランク研究所, 教授 ; BARANTON G. フランス, パスツール研究所, 教授 ; WILSKE B. ドイツ, ミュンヘン大学ペッテンコーファー研究所, 教授 ; KORENBERG E. ロシア, ガマレーヤ研究所, 教授 ; JOHNSON R.C アメリカ, ミネソタ大学・医学部, 教授 ; 福長 将仁 福山大学, 薬学部, 教授 (20132483) ; 宮本 健司 旭川医科大学, 医学部, 助教授 (30091581) ; 渡辺 治雄 国立予防衛生研究所, 細菌部, 部長 (70142130) ; 川端 真人 神戸大学, 医学部, 教授 (30175294)
• キーワード: ライム病 / B.burgdorferi / B.garinii / B.afzelii / 遺伝学的解析 / 伝播経路 / ボレリア種鑑別 / 接着因子

研究概要

ライム病病原体の遺伝種と媒介マダニ,保有体宿主との相関,地理的分布と伝播機序の解明と診断法標準化,並びに予防法の確立研究を展開し,以下のような成果を挙げることができた.
1.新種B.miyamotoi,B.tanukii,B.turdaeを日本のマダニより分離,rRNA,鞭毛遺伝子解析から分類上の位置を示した.
2.鞭毛遺伝子に基づく系統樹を作成,シュルツェマダニ由来のB.miyamotoiが回帰熱ボレリアにより近いことを示した.
3.B.burgdorferi sensu stricto,B.afzelii,B.gariniiが確定した病原体で,稀少のB.miyamotoi,B.tanukii,B.turdaeに病原性はないと思われた.日本でヒト咬傷例の多いヤマトマダニI.ovatus由来B.japonicaは,SCIDマウスによる感染実験で3週間後に弱い関節炎を誘導し,病原性は弱いが,非病原性ではないことを示した.
4.病原株を1年間試験管内継代培養し,主要表層蛋白質OspCの発現がライム病感染,あるいは病原性発現に関与する可能性を示唆した.
5.ライム病ボレリアは宿主細胞表層のガラクトシルセラミド及びグルコシルセラミドに強く結合し,この接着にはボレリアの41kDa鞭毛蛋白質,61kDa熱ショック蛋白質,67kDa未知蛋白質が関与することを示した.
6.各種分離株のOspC遺伝子の塩基配列が同一種の株間でも極めて多様で,この多様性が宿主免疫機構からの逃避に関与している可能性を示した.
7.同一種内における遺伝的多様性を利用するOspC-PCR-RFLPによる株鑑別法の開発に成功した.本法は同一遺伝種に属する株の鑑別を可能とし,新たな分子疫学マーカーとして使用可能である.複数のボレリア種の混合培養や多重感染の鑑別検出が可能であることを示した.
8.極東のライム病ボレリア種の遺伝学性状は欧,米タイプ異る.日本の優勢種はB.gariniiで極東ロシア由来株に類似しロシア方面からの伝播が考えられた.中国,ロシアには日本型B.afzeliiを見出さなかった.
9.柳原,宮本,福長,増澤を欧米に述べ7回派遣,B.Wilske教授,R.C.Johnson教授を招聘した.

研究成果

• [文献書誌] Kenji Miyamoto et al.: "Competence of a migratory bird,red-feilied thrush(Turdus chrysolaus)、as an reservior for the Lymedisease spirochetes in Japan." Acta Tropica. 22(in press). (1997)
• [文献書誌] Toshihiko Umemoto et al.: "Treponewa medium sp. nor., isolated from subgingival dental plaque." Int. J.Syst. Bacteriol.47・1. 67-72 (1997)
• [文献書誌] Wang Jianhui et al.: "Consenusus sequence on the genes encooling the major outer surface protein (OspA and OspB)of Borrelia garinii isolate." Microbiol. Immunol.41・2. 83-91 (1997)
• [文献書誌] Toshiyuki Masazawa et al: "Application of PCR-reatriction frapment length ploymopkisum sualysis of CspC gene for deteation of mixed cculture and epideuiolsgical tool of Borrelia borgdorferi sensu stucto" Clin. Diag. Lab.Immunol.4・1. 60-63 (1997)
• [文献書誌] Yukita Sato et al.: "Prevaiebce of the Lyme disease spirochetes in ixodes perbuleatus and wild rodents in Far East Russia" Appl. Environ.Microbiol.62・10. 3807-3889 (1996)
• [文献書誌] Toshiyuki Masuzawa et al.: "Characterization of Borrelia spp. isolated from tick, Ixcdes Taunki and small roalents in Japan." J.Wildl. Dis.32・4. 565-571 (1996)
• [文献書誌] Toshiyuki Masazawa et al.: "charactarization of Borrelia sp.:solated from Ixodes tannki,I.turdus,and I.columnae in Japan by restriction fragment leugth polymorpliom of rrl(5S)-rrl(23S)intengenic spailr osplicon." FEMS Microbiol,Lett.142・1. 77-83 (1996)
• [文献書誌] Toshiyuki Masuzawa et al.: "Comparison CspA serofyyes for Borrelia burgdorferi senou lato from Japan, Europe and North America." Microbiol. Immunol.40・8. 539-545 (1996)
• [文献書誌] Toshiyaki Masuzawa et al.: "Preseuce of common autigenic opitope in outer surface protein(Osp)A and OspB of Japanese isolates identified as Borrelia garinii." Microbiol. Immunol.40・6. 455-458 (1996)
• [文献書誌] 増澤俊幸 他: "Borrelia japonica感染が疑われるライムボレリア症の一例" 感染症雑誌. 70・3. 264-267 (1996)
• [文献書誌] Fubito Ishiguro et al.: "Reservir competence of the vole,clethrionomgs rufoconus bedforaial, for Borrelia garinii or Borrelia of zelii." Microbiol. Immunol.40・1. 67-69 (1996)
• [文献書誌] Emiko Isogai et al.: "Borrelia bung doiferi sensu lato in an evalesic euvironment:wild Sika deer (cervus nippon yesoenais) with infected ticks and antiboclies." Microbiol. Immunol.40・1. 13-19 (1996)
• [文献書誌] Masahito Fukunaga et al.: "Borrelia tanuki cp、nov.and borreliaturdae sp.nov. found from ixodid tieks in japan rapid species idertification by 16SrRNA gene-targeted PCR analyais." Microbiol.Immunol.40・11. 877-881 (1996)
• [文献書誌] Masahito Fukunaga et al.: "Phylogonetic analysis of Borrelia species based on flagellin gene sequences and its opplication for molecular typing of Lyme disease Borrelioe." Int. J. Syst. Bacteriol. 46・4. 898-905 (1996)
• [文献書誌] Yukie Takahashi et al.: "Phyaical mapping of the Borrelia miyamotoi HT31 chromoosome in comparison with that of Borreliu turicatae, an etiological agent of tick-borne reltpsing feber." Clin. Diag. Lab. Immunol.3・5. 533-540 (1996)
• [文献書誌] Akiko Hanase et al.: "Homology of variable major protein genes between Borrelia hermsii and Borrelia miyamotoi." FEMS Microbiol. Lett.140・2ー3. 131-137 (1996)
• [文献書誌] Masahito Fukunaga et al.: "Characterization of spirocheter isolated from ticks(Ixodes tanuki,ixode,turdus and ixodes colunmae) and conparison of the sequence with thosed of Borrelia burg darferi senar lato strains" Appl. Environ. Microbiol.62・7. 2338-2344 (1996)
• [文献書誌] Masahito Fukunaga et al: "A phyloagnetic analysis of Borrelia burgdater senou lato isolates associated with Jyme lisease in Japan by blagellin gene sequence determination." Int. J. Syst.Bacteriol.46・2. 416-421 (1996)
• [文献書誌] T.Masuzawa, Y.Yanagihara(T.Talaska Ed.): "Borreliosen in Brandenburg -Die Erreger-Vorkommen und klinische Relevanz-" Bad Saarow(Germany)(印刷中), (1997)
• [文献書誌] 柳原保武,増澤俊幸(武田.林 編): "細菌学-ライム病ボレリア-" 朝倉書店(印刷中), (1997)
• [文献書誌] 柳原保武(天児,南嶋編): "戸田新細菌学(31版)-スピロヘーター" 南山堂, 990 (1997)
• [文献書誌] Y.Yanagihara,T.Masuzawa(Tylewska-wierzbanowska Ed.): "Report of WHO Workshop on Lyme Borreliosis Diagnosis and Surveillance" World Health Ooganization, 220 (1996)