1997 年度実績報告書

遺伝子発現の変化による血管内皮細胞の血栓形成機能に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号	08044333
研究機関	国立循環器病センター
研究代表者	宮田敏行国立循環器病センター研究所, 脈管生理部, 室長 (90183970)
研究分担者	EVAN Sadler Washington University School of Medicine, 教授日根智恵美国立循環器病センター研究所, 脈管生理部, 室員 (10280819) 小亀浩市国立循環器病センター研究所, 病因部, 室員 (40270730) 加藤久雄国立循環器病センター研究所, 病因部, 部長 (80029959)
キーワード	動脈硬化 / 血管内皮細胞 / ホモシステイン / クローニング / RTP / Herp / リン酸化蛋白質
研究概要	動脈硬化性刺激、ホモシステイン、で発現が上昇する遺伝子RTPとHerpの研究を行った。RTPのポリクローナル抗体を作成し免疫学的手法を用いて局在性を検討した。RTPは細胞質蛋白質であり、腎近位尿細管と小腸微絨毛に強く発現していることが判明した。またRTPは8ケ所のリン酸化部位を有するリン酸化蛋白質であり、細胞増殖時にリン酸化されることが判明した。また、RTPは細胞増殖時に増加し、増殖停止期にはその量が減少した。リン酸化は細胞周期に同調していなかった。RTPはホスファチジルセリンに親和性を示すものの、ホスファチジルコリンとホスファチジルエタノールアミンには親和性を示さなかった。 Herpはそのアミノ酸配列から膜蛋白質であると予想された。組み換え体を用いてポリクローナル抗体を作成した。免疫学的手法を用いて局在を調べたところ、Herpは小胞体に存在した。また、Green fluorescence proteinとのキメラを作成したところ、Herpキメラ蛋白質は小胞体に移行した。Herpの細胞内結合蛋白質をTwo-hybrid法を用いて検索したところ、Herp interacting protein(HIP)をクローニングした。HIPは236アミノ酸残基から成る。HIPはNeuroendocrine specific protein という小胞体局在蛋白質にホモロジーを示した。このことは、Herpは小胞体局在蛋白質HIPと結合して小胞体に局在していると考えられた。動脈硬化惹起刺激によりRTPやHerpが発現し血管内皮細胞の形質が変化する。本研究はこれら新蛋白質の性質を明らかにした。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] T.Sakata: "Increased activated factor VII levels caused by intake of natto.a Japanese vitamin K-rich food prepared from fermented soybean." Blood Coag Fibrinolysis. 8. 533-534 (1997)
[文献書誌] N.Sato: "Lysophosphatidylcholine decreases the synthesis of tissue factor pathway inhibitor in human umbilical vein endothelial cells." Thromb.Haemost.79. 217-221 (1998)
[文献書誌] T.Fujimura: "Three novel missense mutations in unrelated Japanese deep vein thrombosis patients with type I and type II protein S deficiency." Thromb.Res.,. (in press.). (1998)
[文献書誌] T.Miyata: "Factor X Nagoya 1 and Nagoya 2:A CRM-factor X deficiency and a dysfunctional factor X characterized by substitution of Arg306 by Cys and Gly366 by Ser." Thromb.Haemost.,March issue,. (in press.). (1998)
[文献書誌] N.Sato: "Lysophosphatidylcholine induced genes in human umbilical vein endothelial cells:Use of differential display analysis." J.Biochem.,. (in press.). (1998)
[文献書誌] A.Katsumi: "The carboxyl-ternimal region of protein C is essential for its secretion." Blood,. (in press.). (1998)
[文献書誌] 宮田敏行: "ホモシステインと血栓症" Mebio., 6 (1997)
[文献書誌] 宮田敏行: "「高ホモシステイン血症と血栓症」 Annual Review 血液1998" 中外医学社, 8 (1998)

1997 年度 実績報告書

遺伝子発現の変化による血管内皮細胞の血栓形成機能に関する研究

研究代表者

宮田 敏行 国立循環器病センター研究所, 脈管生理部, 室長 (90183970)

研究成果

[文献書誌] T.Sakata: "Increased activated factor VII levels caused by intake of natto.a Japanese vitamin K-rich food prepared from fermented soybean." Blood Coag Fibrinolysis. 8. 533-534 (1997)

[文献書誌] N.Sato: "Lysophosphatidylcholine decreases the synthesis of tissue factor pathway inhibitor in human umbilical vein endothelial cells." Thromb.Haemost.79. 217-221 (1998)

[文献書誌] T.Fujimura: "Three novel missense mutations in unrelated Japanese deep vein thrombosis patients with type I and type II protein S deficiency." Thromb.Res.,. (in press.). (1998)

[文献書誌] T.Miyata: "Factor X Nagoya 1 and Nagoya 2:A CRM-factor X deficiency and a dysfunctional factor X characterized by substitution of Arg306 by Cys and Gly366 by Ser." Thromb.Haemost.,March issue,. (in press.). (1998)

[文献書誌] N.Sato: "Lysophosphatidylcholine induced genes in human umbilical vein endothelial cells:Use of differential display analysis." J.Biochem.,. (in press.). (1998)

[文献書誌] A.Katsumi: "The carboxyl-ternimal region of protein C is essential for its secretion." Blood,. (in press.). (1998)

[文献書誌] 宮田 敏行: "ホモシステインと血栓症" Mebio., 6 (1997)

[文献書誌] 宮田 敏行: "「高ホモシステイン血症と血栓症」 Annual Review 血液1998" 中外医学社, 8 (1998)

1997 年度実績報告書

宮田敏行国立循環器病センター研究所, 脈管生理部, 室長 (90183970)

[文献書誌] 宮田敏行: "ホモシステインと血栓症" Mebio., 6 (1997)

[文献書誌] 宮田敏行: "「高ホモシステイン血症と血栓症」 Annual Review 血液1998" 中外医学社, 8 (1998)