乳腺における上皮小体ホルモン関連タンパクの役割

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08045059
• 研究機関: 酪農学園大学
• 研究代表者: 岡田 洋之 酪農学園大学, 獣医学部, 助教授 (50166419)
• 研究分担者: ROSOL Thomas オハイオ州立大学, 獣医学部, 教授 ; CAPEN Charle オハイオ州立大学, 獣医学部, 教授 ; 中田 健 酪農学園大学, 獣医学部, 助手 (10241069)
• キーワード: 乳腺 / 上皮小体ホルモン関連タンパク

研究概要

乳腺は様々なホルモンや成長因子によるその発育や形態学的変化を遂げているため、それらホルモンや成長因子の働きをそれぞれ明確にすることは困難である。上皮小体ホルモン関連タンパク(PTHrP)は泌乳中の乳腺から産生され、生物活性を有する形で乳汁中に存在する。乳腺上皮細胞から産生されている上皮小体ホルモン関連タンパク(PTHrP)の産生機構を解明する目的で乳腺上皮細胞の培養を行った。
分娩後1週間以内の乳牛より採材した乳腺組織をコラゲナーゼを用いて腺房に分散し、凍結保存した。ラットの尾腱より抽出したコラーゲン上で培養したところ、培養6日目にconfluent状態となりゲルの収縮が始まった。培地に15%濃度のウシ胎子血清を加えた培養上清中のPTHrP濃度をラジオイムノアッセイ法により測定したところ、2〜4ng/mlの産生が見られ、培養14日目までその産生は持続した。無添加培地ではPTHrPの産生は1〜2mg/mlと有為に低下した。収縮したゲルのパラフィン切片を作成し観察したところ、立方上皮ないしは立方円柱上皮細胞がゲル上にみられ、4種類の抗PTHrP抗体、PTHrP (1-34)、PTHrP (1-36)、PTHrP (15-34)、PTHrP (34-53)を用いて免疫染色を行ったところ、いずれの抗体に対しても上皮細胞が陽性に染まった。
培養上清中のインターロイキン(IL)-1ならびにIL-6様活性を生物学的に測定したところ、培養ウシ乳腺細胞からいずれのサイトカイン産生が明らかとなった。またRT-PCR法により各種のサイトカインのmRNAの発現を検索したところ、IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-αおよびGM-CSFの発現が確認されたが、IL-2、IL-4およびINF-γの発現は見られなかった。
さらにイヌの乳腺腫瘍58例をPTHrP抗体を用いて免疫染色を行ったところ、良性悪性を問わず全例の腫瘍細胞が陽性に染まり、PTHrPが乳腺において病態生理学的役割をになう可能性が示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Okada H, Schanbacher FL, McCauley LK, Capen CC, Weckmann MT, Rosol TJ: "Secretion of parathyroid hormonerelated protein by bovine mammary cells in vitro." Journal of Bone and Mineral Metabolism. 13 Suppl. 41. S125-S128 (1994)
• [文献書誌] Okada H, Schanbacher FL, McCauley LK, Weckmann MT, Capen CC, Rosol TJ.: "In vitro model of parathyroid-hormone related protein secretion from mammary cells isolated from Iactating cows." Domestic Animal Endocrinology. 13.5. 399-410 (1996)
• [文献書誌] Okada H,Nishijima Y, Yoshino T, Grone A, Capen CC, Rosol TJ.: "Immunohistochemical localization of parathyroid hormone-related protein in canine mammary tumors." Veterinary Pathology. 34.3(in press). (1997)
• [文献書誌] Okada H, Ito T, Ohtsuka H, Kirisawa R, Iwai H, Yamashita K, Yoshino T, Rosol TJ.: "Detection of interleukin-1 and interleukin-6 on cryopreserved bovine mammary epithelial cells in vitro." Journal of Veterinary Medical Science. 59(in press). (1997)