変異c‐kit遺伝子導入によるドミナント・ネガティブ抗腫瘍効果の解析

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08266238
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 千葉 勉 京都大学, 医学研究科, 教授 (30188487)
• 研究分担者: 木下 芳一 神戸大学, 医学部, 講師 (30243306)
• キーワード: c‐kit / stem cell factor(SCF) / ドミナント・ネガティブ効果 / 変異c‐kit / 胃癌

研究概要

ヒト胃癌細胞ECC12はc‐kitとstem cell factor(SCF)を同時に発現しており、これによるオートクリン増殖がおこなわれている。一方GCIY細胞は、正常c‐kitと子分子c‐kitを発現しているが、SCFを投与しても、そのチロシン・リン酸化は見られず、また細胞増殖も促進されない。そこで、本細胞からc‐kitをクローニングしたところ、正常c‐kitと同時に、変異によりストップ・コドンとなった小分子c‐kitが得られた。本小分子c‐kitはチロジン・キナーゼ・ドメインのチロジン残基がストップ・コドンとなっており、したがってチロジン・リン酸化による二量体が生成されない可能性がある。これらのcDNAの全長を得、これを別々に、または同時にCOS細胞に導入したところ、正常c‐kitのみの導入細胞ではSCFによりc‐kitのチロシン・リン酸化がみられ、細胞増殖も促進されたが、小分子c‐kitのみの導入では変化はみられなかった。さらにこれらを同時に発現したCOS細胞では、SCFによるチロシン・リン酸ならびに増殖促進効果はc‐kitのみの導入細胞より著名に抑制されていた。
以上より、小分子c‐kit遺伝子は、SCFと結合はするもののSCF受容体としてまったく機能していないと考えられた。さらに小分子c‐kitは正常c‐kitの作用を抑制するドミナント・ネガティブ効果をもつことが示された。以上の事実から、c‐kitを発現している癌に対して本小分子c‐kit遺伝子を用いることにり、遺伝子治療がおこなえる可能性が考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Okada,A.,et al.: "Erythropoietin stimulates proliferation of rat cultured gastric mucosal cells" Digestion. 57. 328‐332 (1996)
• [文献書誌] Hassan,S.,et al.: "Presence of prostaglandin EP4 receptor gene expression in a rat gastric mucosal cell line." Digestion. 57. 196‐200 (1996)
• [文献書誌] Nakata,H.,et al.: "Involnement of β adrenergic receptor kinase 1 in homologous desensitization of histamine H2 receptors in human gastric" Digestion. 57. 406‐410 (1996)
• [文献書誌] Kinoshita,Y.,et al.: "Production and activation of hepatocyte growth factor during the healing of rat gastric ulcer." Digestion. 58(in press). (1997)
• [文献書誌] Asahara,M.,et al.: "Reg gene expression is increased in rat gastric enterochromaffin‐like cells following water immersion stress." Gastroenterrology. 111. 45‐55 (1996)
• [文献書誌] Kinoshita,Y.,et al.: "Distribution of prostaglandin E receptors in the rat gastrointestinal tract." Prostaglandins. (in press).