胆管側膜上有機アニオン輸送担体のクローニングとチャンネル機能の構造

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08268214
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 杉山 雄一 東京大学, 薬学部, 教授 (80090471)
• 研究分担者: 鈴木 洋史 東京大学, 薬学部, 助教授 (80206523)
• キーワード: 有機アニオン輸送担体 / Dubin-Johnson症候群 / EHBR / 変異機構 / cMOAT / 一次性能動輸送 / cDNAクローニング / 胆汁排泄

研究概要

ラット胆管側膜上に存在する、有機アニオン輸送性一次性能動輸送担体(canalicular multispecific organic anion transporter;cMOAT)のcDNAクローニングを行った。クローニングの戦略としては、cMOATの基質特異性が、multidrug resistance associated protein(MRP)と類似していることに着目し、MRPのABC領域との相同性に着目する方法をとった。その結果、4623bpよりなる新規cDNA配列が得られた。この配列をプローブとしてNorthen blotを行ったところ、正常ラット肝臓polyA+RNAとのhybridizeは観察されたものの、cMOAT機能を欠損する変異ラットEisai hyperbilirubinemic rat(EHBR)においてはその発現は検出されなかった。更に、HEBRにおける変異機構について検討を加えたところ、855番目のアミノ酸をコードする遺伝子に一塩基置換が生じ、その結果としてopen reading frame中にstop codonが挿入されていることが示された。さらにcMOAT cDNAを哺乳類発現ベクターにsubcloningし、その機能をNIH3T3細胞を基にしたtransfected cellを用いることにより測定したところ、cMOAT機能が観察された。これらの結果は、単離されたcDNAがcMOATをコードすることを示している。

研究成果

• [文献書誌] M.Yamazaki: "Recent advances in carrier-mediated hepatic uptake and biliary excretion of xenobiotics." Pharm.Res.13. 497-513 (1996)
• [文献書誌] K.Ito: "Expression of a putative ATP-binding cassette region,homologons tothat in multidrug resistame associated protein(MRP),is hereditarilydefective in Eisai hyperbilirubinemic rats(EHBR)." Int.Hepatol.Commun.4. 242-299 (1996)
• [文献書誌] H.Shimamura: "Biliary excretion of glycyrrhizin in rats:Kinetic basis for the muluplicity in the bile canalicular transport of organic anions." Pharm.Res.13. 1833-1839 (1996)
• [文献書誌] K.Ito: "Molecular cloning of canalicular multispecific organic anion transporter defective in Eisai hyperbilirubinemic rats." Am.J.Physiol.272. G16-G22 (1997)
• [文献書誌] H.Ishizuka: "Temocapril,a novel angiotensin converting enzyme inhibitor,is excreted into bile via an ATP dependent active transporter(cMOAT)that is deficient in Eisai hyperbilirubinemic mutant rats(EHBR)" J.Pharmacol.Exp.Ther. 28(in press). (1997)
• [文献書誌] O.Takenaka: "Carrier-mediated active transport of the glucuronide and sulfate of 6-hydroxy-5,7-dinothy 1-2-methylamino-4-(3-pyridylmethyl)benzothiazolle(E3040)into rat liver:Quantitative comparison of permeability in isolated hepatocytes,perfused liver and liver in vivo." J.Pharmacol.Exp.Ther.280(in press). (1997)