新しいグルタチオン抱合体およびP糖蛋白型排出ポンプの構造と機能

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08268239
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 和田 守正 九州大学, 医学部, 助教授 (20220965)
• 研究分担者: 河野 公俊 産業医科大学, 医学部, 教授 (00153479) ; 原田 伸透 九州大学, 医学部, 助手 (90264043)
• キーワード: チャネル / トランスポーター / ABCファミリー / MDR / MRP / 薬剤耐性 / YAC / ディファレンシャル・ディスプレイ

研究概要

本研究の目的はATP駆動型トランスポータとチャンネルの構造、機能協関を明らかにするために、トランスポータの機能異常及び、突然変異の宝庫である様々な薬剤耐性株から新しいトランスポータ遺伝子を単離し、解析することにある。この目的に沿って今年度は3つのアプローチにより以下の成果をあげた。
【1】ATP結合カセットのプライマーを用いたPCRベースのアプローチにより、ヒトcMOAT(canalicular multispecific organic anion transporter)遺伝子を単離した。また、細胞内蓄積の下がったシスプラチン耐性株3株で同遺伝子の発現亢進を認め、ヒトcMOATがグルタチオン抱合体排出ポンプ(GS-Xポンプ)である可能性が示唆された。疎水性解析の結果を、MRP,MDR1とともに図1に示す。
【2】Differential display法により、シスプラチン耐性株で発現量が亢進するクローンが8つ単離された。うち2クローンはアクチン結合蛋白質のT-プラスチンと同定され、細胞内蓄積の低下したシスプラチン耐性株3株でいずれも発現亢進が認められ、チャネルとトランスポーターの機能協関におよぼす細胞骨格系の役割という視点から今後進めていきたい。
【3】ヒト染色体7q21.1のMDR遺伝子領域から、エキソントラップ法により新しいトランスポーター遺伝子の単離を試みた結果、ソルシンを含む数個のクローンが得られた。ソルシンは最近、リアノジンリセプターを安定化させるという報告があり、トランスポーター関連遺伝子のゲノム上での有機的編成という視点から興味深い。

研究成果

• [文献書誌] Hisano,T.: "Incr eas ed Expression of T-Plastin Gene in Cisplatin-Resistant Human Cancer Cells:Identification by mRNA Differential Dysplay" FEBS Letter. 397. 101-107 (1996)
• [文献書誌] Taniguchi,K.: "A human canalicular multispecific organic anion transporter(cMOAT)gene is overexpressed in cisplatin resistant human cancer cell lines with decreased drugaccumulation" Cancer Research. 56. 4124-4129 (1996)
• [文献書誌] Taniguchi,K.: "Drug-induced down-regulation of topoisomeraase l in human epidermoid cancer cells resistant tosaintopin and camptothecins" Cancer Research. 56. 2348-2354 (1996)
• [文献書誌] "Functional expression of yeast artificial chromosome(YAC)-human multidrug resistance genesin mouse cells" Genome Research. 5. 245-258 (1995)
• [文献書誌] K.Torigoe: "YAC-based 1.5 Mb contig spanning the human multidrug resistantce gene region and delineating the amplification unit in two human multidrug resistant cell lines" Genome Research. 5. 233-244 (1995)
• [文献書誌] A.Yokomizo: "Mar kedly decreased expression of glutathione S-transferase-p gene in human cancer cell ines resistant to buthioninesulfoximine,an inhibitor of cellular glutathionesynthesis" J.Biol.Chem.270. 19451-19457 (1995)