小児悪性腫瘍における癌抑制遺伝子の探索と単離

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08283102
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 林 泰秀 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (30238133)
• 研究分担者: 小林 茂俊 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (70260487) ; 森脇 浩一 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (10251274) ; 小林 美由紀 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60205391) ; 柳澤 正義 東京大学, 医学部・附属病院, 教授 (90049031) ; 別所 文雄 東京大学, 医学部・附属病院, 助教授 (40010285)
• キーワード: 神経芽腫 / 白血病 / 癌抑制遺伝子 / 染色体欠失地図 / ^6P16遺伝子 / DCC遺伝子 / マイクロサテライト / 多型マーカー

研究概要

今年度は、神経芽腫では81例の腫瘍と正常細胞を用い、各染色体上の多型プローブを用いてloss of heterozygosity(LOH)の検討を行った。LOHは1pでは25%、、2qでは32%、9pでは40%、11qでは25%、14qでは32%、18qでは40%に認められた。9番の欠失部位の11個のマーカーによる検討では、9pではD9S162とIFNAの間に、9qではD9S152とD9S158の間が高頻度のLOHがみられ、この領域に癌抑制遺伝子が存在すると推定された。この領域に存在するp16遺伝子のSouthern法の検討では、homozygous deletion(HD)はみられなかった。PCR-SSCP法の検討では、80例中1例にcodon52でmissense mutationがみられた。さらにNBの細胞株を用いてNorthenとWestern法により発現を検討したところ、19株中12株で発現の消失がみられた。EcoRIとSmaIを用いて検討したところ、12株中5株にmethylationがみられることが判明した。18qでは大腸癌から癌抑制遺伝子として単離されたDCC遺伝子を原因遺伝子の候補として検討を行った。RT-PCR法による検討では、細胞株25株中12株(48%)、新鮮腫瘍32例中14例(44%)に発現の消失や減弱がみられた。25組のプライマーを作成し、PCR-SSCP法を用いて変異の検討を行い、codon176とcodon1105のmissense変異をみいだしたが、nonsense mutationはみられなかった。白血病での検討では、HDはT-ALLで56例中26例(46%)、B前駆型ALLで58例中22例(38%)にみられ、それぞれにnonsense mutationが3例と2例に同定され、p16遺伝子がALLの9p21欠損の原因遺伝子であることが明らかになった。また11q23に座位するMLL遺伝子を用いてt(5;11)、t(X;11)、t(11;16)、t(11;12)、t(11;15)、より3つの新しい遺伝子の単離に成功した。現在これらの遺伝子の性状の検討、キメラcDNAによる機能解析を行っている。

研究成果

• [文献書誌] Tomohiko Taki: "Fusion of the MLL gene with two different genes,AF6 and AF-5d,by a complex translocation involving chromosomes 5,6,8 and 11 in infant leukemia" Oncogene. 13. 2121-2130 (1996)
• [文献書誌] Shigetoshi Kobayashi: "Mutations of the Btk gene in twelve unrelated families with X-linked agammaglobulinemia in Japan:Immunological phenotypes are inconsistent with the location of the mutations" Human Genetics. 97. 424-430 (1996)
• [文献書誌] Hiroaki Ohnishi: "Infrequent matations of the P53 gene in hepatoblastomas" Gene Chromosomes Cancer. 15. 187-190 (1996)
• [文献書誌] Hiroaki Ohnishi: "Homozygous deletions of P16/MTS1 and P15/MTS2 genes in t(1;19)-negative but not in t(1;19)-postive B precusor acute lymphoblastic leukemia in chilhood" Leukemia. 10. 1104-1110 (1996)
• [文献書誌] Tomohiko Taki: "Frequency and clinical significance of the MLL gene rearrangemonts in infant acute leukemia." Leukemia. 10. 1303-1307 (1996)
• [文献書誌] Kakuda: "A novel human leukaemic cell line,CTS,has a t(6;11)chromosomal translocation and characteristics of pluripotent stem cells." British Journal of Haematology. 95. 306-318 (1996)
• [文献書誌] Yoshiaki Tsuchida: "Genetic clinical markers of human neuroblastomd with special reference to N-myc.oncogene:Amplified or not amplified?-Overview." Tumor Biology. 17. 65-74 (1996)
• [文献書誌] Akira Inoue: "Competitive polymerase chain reaction for the quantification of N-myc gene mumber in neuroblastomd" Tumor Biology. 17. 262-270 (1996)
• [文献書誌] Atushi Ohshima: "11q23 aberation is an additional chromosomal change in de novo acute leukemia after treatment with Etoposide and Mitoxantrone." America'n Journal of Hematology. 53. 264-266 (1996)
• [文献書誌] Junko Takita: "Deletion map of chromosome 9 and P16(ODKN2A) gene alterations in neuroblastoma." Cancer Research. 1997年4月(発表予定). (1997)
• [文献書誌] Kohmei Ida: "Detection of chimeric mRNA by reverse transcviptase chain reaction for diagnosis and monitering of acute leukemias with 11q23 abnormalities" Medical Pediatric Oncology. (in press).
• [文献書誌] Hirofumi Kobayashi: "Inversion of chromosome 11,Inv(11)(p15q22)as a recurring chromosomal aberration associated with deanoro and secondary myeloid malignancies." Gene Chromosomes Cancer. (in press).