| 研究課題/領域番号 |
08406018
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
東條 英昭 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (20041668)
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| 研究分担者 |
山内 啓太郎 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助手 (70272440)
澤崎 徹 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (00012047)
酒井 仙吉 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (80114487)
高橋 迪雄 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (30011943)
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| キーワード | 制限酵素 / トランスジェニック / EGFP / 蛍光蛋白 / 胚 |
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| 研究概要 |
1.受精卵前核に外来遺伝子と制限酵素とを同時に顕微注入す方法が、Tgマウスの生産効率向上に有効であるかどうかを検討した。EcoR1(注入量、10^<-7>Uおよび5×10^<-8>U)と共に遺伝子DNAを受精卵前核に顕微注入し、体外で後期胚にまで発生させ、Tg胚の割合を解析した。DNAの単独注入では平均9.1%のTg胚が検出されたのに対して、同時注入では、17.5%のTg胚が検出された。同様な方法により処理した胚を偽妊娠マウスの卵管に移植し、産子から抽出したDNAを通常のPCR法により解析した実験では、単独注入で生まれたマウスからはTg個体は全く得られなかったのに対して、同時注入では、11.4%のTg個体が検出された。
2.EGFPをマーカーとしてTg胚の選別法について検討した。受精卵前核にCMV・β-actin/EGFP遺伝子を顕微注入し生存胚を体外培養した。その後、4細胞-胚盤胞期に、それぞれ蛍光顕微鏡で観察し、後期胚について、モザイク様に発光した胚と全体に発光した胚とに分類した。一部を、Bal31・Dpnlを用いるTg胚選別法により、蛍光発光とTg胚との関係について解析した。他の胚は、犠妊娠ICRマウスの子宮へ移植し、生まれたマウスのTg個体について解析した。なお、対照には非発光胚を用いた。大部分は桑実期以後に強い発光が観察された。Soeらの方法によりTg胚を解析した結果、発光胚の約80%以上がTg胚と判定された。一方、非発光胚でも極一部Tg胚の存在が確認された。なお、移植実験の解析は現在進行中である。また、胚におけるEGFPの発現が、培養液の鮮度に強く影響されることが認められた。
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