血栓性の成因と病態,とくに血液凝固とその制御機構障害への分子生物的アプローチ

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08407034
• 研究種目: 基盤研究(A)
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 松田 道生 自治医科大学, 医学部, 教授 (50048980)
• 研究分担者: 朝倉 伸司 自治医科大学, 医学部, 講師 (70245033) ; 三室 淳 自治医科大学, 医学部, 講師 (10221607) ; 諏合 輝子 自治医科大学, 医学部, 講師 (60183844) ; 坂田 洋一 自治医科大学, 医学部, 助教授 (40129028)
• キーワード: フィブリノゲン / フィブリン / 遺伝性異常フィブリノゲン / フィブリン重合 / 一過性虚血発作 / 接着分子 / 接着分子受容体 / RGD配列

研究概要

a.Fibrinogen(Fbg)の遺伝性変異の解析:Fbg Caracas IIの電顕学的分析で見出されたFbnゲル構造の異常,およびFbg Kurashiki Iで重合障害の分子機作を解明して投稿していた2つの論文が印刷された(業績目録参照).Fbnの重合障害を主徴とするFbg Niigataで糖付加構造を作る新変異型(Bβ-Asn 160→SerとAsn-X-Serの配列形成)を同定した.この変異はヘリックス構造の中央に在ることから,重合障害への余剰糖鎖の関与の模様を次年度に分析の予定である(第16回国際血栓止血学会,Florenceで報告の予定).また,反復する一過性虚血発作で黒内障と診断された患者に見出されたFbg KumamotoでFbnゲルへのthrombinの親和性が著しく低いことが判明した.この為,thrombinを吸着限局化して新たなFbn形成を抑制する機構が障害され,易血栓性に陥っているものと結論し,Thrombosis and Haemostasisに投稿中である.ドイツから解析を依頼されているFbg MarburgではAα鎖150残基の欠如の為,変異Aα鎖にalbumin1分子がdisulfide結合し,これが活性型第XIII因子に触媒されて他のFbnのγ鎖とisopeptide結合による架橋を形成すること,この為Fbn立体構造が変化し線溶酵素plasminに抵抗することが判明した.この患者で観察された出血と血栓形成という二律背反する現象の一部はこの事実に由るものと理解された.この成績は国際血栓止血学会(既出)で報告の予定で,目下投稿を準備中である.
b.接着分子としてのFbnの分子機作:線維芽細胞はFbn培地上で接着,進展するが,この時,従来知られていたvitronectin受容体(αvβ3)のみならずβ1-classの受容体を発現する事を見出し,J.Biol.Chem.に投稿,受理された.Fbg→Fbn転換により,接着分子としての活性中心をなす2箇所のRGD配列が露呈されることも判明したことから,血栓形成時に血中に出現するFbn-Fbg複合体上での線維芽細胞の接着伸展を解析し,投稿準備中である.この解析に自家製の抗体JF-43(Blood 88:2109,1996)が威力を発揮した.

研究成果

• [文献書誌] Kazuki Niwa: "A γ Gly-268 to Glu substitution is responsible for impaired fibrin assembly in a homozygous dysfibrinogen Kurashiki I." Blood. 87(11). 4686-4694 (1996)
• [文献書誌] Gilbu Soe: "A monoclonal antibody that recognizes a neo-antigen exposed in the E domain of fibrin monomer complexed with fibrinogen or its derivatives. Its application to the measurement of soluble fibrin in plasma." Blood. 88(6). 2109-2117 (1996)
• [文献書誌] John L.Woodhead: "The ultrastructure of fibrinogen Caracas II molecules,fibers and clots." J.Biol.Chem.271(9). 4946-4953 (1996)
• [文献書誌] Michio Matsuda: "The structure-function relationship of hereditary dysfibrinogens." Int.J.Hematol.64. 167-179 (1996)
• [文献書誌] 周紅: "フィブリンの重合とγ鎖架橋形成を阻害する好フィブリノゲンモノクロナル抗体の性状" 日本血栓止血学会誌. 7(3). 244-250 (1996)
• [文献書誌] 松田道生: "フィブリノゲンの誘導体,とくに可溶性フィブリン(soluble fibrin)とDダイマー(D dimer)について:その生成と存在様式についての考察.その1.可溶性フィブリン" 日本血栓止血学会誌. 8. 24-32 (1997)
• [文献書誌] Seiji Madoiwa: "A battery of monoclonal antibodies that induce unique conformations to evolve cryptic but constitutive functions of plasminogen." J.Biochem.121. 278-287 (1997)
• [文献書誌] Shinji Asakura: "Fibroblats spread on immobilized fibrin monomer by mpbilizing a β1-class integrin,together with a vitronectin receptors,αVβ3 on their surface." J.Biol.Chem.,in press. (1997)
• [文献書誌] Michio Matsuda: "Glycosylation defects in blood clotting. In : Glycoproteins and Disease. J.Montreuil et al.(Eds.)" Elsevier Science B.V., 439-444 (1996)