老人性難聴関連遺伝子の細胞工学 分子生物学的研究とその臨床応用

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08407054
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 高坂 知節 東北大学, 医学部, 教授 (80004646)
• 研究分担者: 大島 猛央 東北大学, 医学部, 助手 (40241608) ; 川瀬 哲明 東北大学, 医学部付属病院, 講師 (50169728) ; 池田 勝久 東北大学, 医学部, 講師 (70159614)
• キーワード: 遺伝子異常 / 外有毛細胞 / 血管条 / 自然老化マウス / 高齢者のQOL / デジタル補聴器

研究概要

1)関連遺伝子のクローニング
老人性難聴患者の末梢血リンパ球DNAからミトコンドリアじDNA、ミオシン遺伝子、POU遺伝子をPCR法により増幅し、その変異をPCR-bSCP(single strand conformation polymorphism)法などにより検出した。DNA塩基配列をDNAシークエンサーによって直接調べた。さらに、DNA異常の染色体座での位置をFISHで同定した。
側頭骨病理標本の遺伝子解析
リンパ球での異常の発現を内耳で調べるため、ミネソタ大学より供与されたヒト側頭骨病理標本のコルチ器、血管条、ラセン神経節からそれぞれDNAを抽出して、上述したDNA異常をPCR法による検出した。
3)モデル動物での遺伝子及び聴覚解析
自然老化マウスで内耳における遺伝子異常の有無と蓄積の程度をRT-PCR法とin situ PCR法で調べた。また、相同組換法により上述の遺伝子の非発現モデル(いわゆるノックアウトマウス)を作製し、これらの遺伝子異常が内耳に及ぼす影響を調べた。またこれらのモデル動物の聴覚と遺伝子の異常との相関を検討した。
4)蝸牛での遺伝子異常の膜蛋白発現に対する検討
モデル動物の有毛細胞、血管条、ラセン神経節細胞でのミオシン、チャネル、受容体の発現の異常を免疫組織学、パッチクランプ法(現有設備)、共焦点レーザー顕微鏡(現有設備)、卵母細胞発現系を駆使して検索した。

研究成果

• [文献書誌] Oshima T,: "Distribution of Ca2+ Channels on cochlear outer hair cells revealed by fluorescent dihydropyridines." Am. J. Physiol.271. C944-C949 (1996)
• [文献書誌] Oshima T,: "Bilateral sensorineural hearing loss associated with the point mutation in mitochondrial genome." Laryngoscope. 106. ,43-48 (1996)
• [文献書誌] Furukawa M,: "Na+, K (+) -ATPase activity in the cochlear lateral wall of the gerbil." Neurosci. Lett.213. 165-168 (1996)
• [文献書誌] Takahashi S,: "Effect of aging on distortion product otoacoustic emissions" Nippon Jibiinkoka Gakkai Kaiho. 99. ,978-984 ((1996))
• [文献書誌] Ueda N,: "Subcellular distribution of protein kinase C in the living outer hair cell of the guinea pig cochlea." Hear. Res.94,. 24-30 ((1996))
• [文献書誌] Hidaka H,: "The Na-K-Cl cotransporters in the rat cochlea : RT-PCR and partial sequence analysis." Biochem. Biophys. Res. Commun.220. 425-430 ((1996))
• [文献書誌] Suzuki H,: "Acta Otolaryngol (Stockh) 116," Carbohydrate composition of stereociliary glycocalyx of the utricle of guinea pig inner ear., 12-16 ((1996))