| 研究概要 |
本研究は多様な精子活性化ペプチド受容体構造を明らかにし、リガンドと受容体の共進化に対する理解を深めることを目的としている。タコノマクラ精子に存在する3種のSAP-III架橋タンパク質とバフンウニ精子のタンパク質の部分アミノ酸配列の比較から、精子活性化ペプチドは3種類のタンパク質(膜結合型グアニル酸シクラーゼ、2種類の精子膜タンパク質)から構成されていると考えられる。これらの3種類のタンパク質のどれに精子活性化ペウチドが結合するかはペプチドによって異なるものと考えられる。本年度は受容体構成タンパク質である膜結合型グアニル酸シクラーゼcDNAをタコノマクラ、オオブンブク及びガンガゼcDNAライブラリーから得るために、既知の20種類の膜結合型グアニル酸シクラーゼに保存されているアミノ酸配列(触媒領域)から、プライマーを作成し、3種のウニ精巣から調製したRNAを用いて、PCRによってDNA断片を増幅し、その塩基配列を決定した。いずれのウニからも複数の異なる膜結合型グアニル酸シクラーゼcDNA断片が得られた。膜結合型グアニル酸シクラーゼは大きく2つに(リガンド結合型-GC-A, Bタイプ及びGC-Cタイプ-と感覚器型-眼あるいは鼻などに発現する-)分けられるが、得られた塩基配列を用いて分子系統学的解析を行った結果、ウニに存在する膜結合型グアニル酸シクラーゼはいずれもGC-A, Bタイプに近いものであることが推測された。また、卵巣及び未受精卵にも数種類の膜結合型グアニル酸シクラーゼが存在することも明らかになった。さらに、精巣、卵巣、未受精卵には可溶性型グアニル酸シクラーゼと思われるグアニル酸シクラーゼの存在を示唆する結果も得られた。
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