卵胞顆粒層細胞の選択死を誘導する受容体分子の検索

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08456141
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 宮本 元 京都大学, 農学研究科, 教授 (00026618)
• 研究分担者: 杉本 実紀 京都大学, 農学研究科, 助手 (20243074) ; 眞鍋 昇 京都大学, 農学研究科, 助教授 (80243070)
• キーワード: 卵巣 / 卵胞 / 顆粒層細胞 / アポトーシス / 細胞死受容体 / ブタ / モノクローナル抗体 / プログラム細胞死

研究概要

哺乳類の卵巣には少数の卵母細胞を選抜して排卵させ、99.9%以上を卵胞閉鎖による選択的死滅に誘導する機構が存在する。この卵胞の生死を選択する分子機構の解明研究の一環として、顆粒層細胞にアポトーシスを誘導する分子機構、特に細胞表面に発現している受容体分子の制御機構の解明を進め、下記の成果、すなわち卵胞顆粒層細胞特異的細胞死受容体の発見とそのシグナル伝達系解明の賭を得た。
(1) 卵胞を構成する内外卵胞膜細胞、顆粒層細胞、卵丘細胞、卵母細胞を顕微鏡下に精密の分離できるブタ卵巣を材料として、卵胞退行に伴って顆粒層細胞に特異的に発現するmRNAを検出・同定するため、健常(卵胞外より卵子-卵丘細胞複合体が視認可)と退行(視認不可)卵胞由来の卵母、卵丘、顆粒層細胞のライブラリーを利用して、サブトラクション-PCR法にて退行卵胞に特異的なmRNAを増幅・同定し、チロシンキナーゼドメインをもつ血小板由来成長因子様の細胞分化制御因子を見いだした。
(2) 健常卵胞から調整した顆粒層細胞を抗原として感作して細胞膜結合性の糖蛋白質と糖鎖構造特に細胞膜表面に発現する顆粒層細胞特異的細胞死受容体分子を検索するため、標的分子を認識・検出できるモノクロナール抗体を作成できた。このモノクロナール抗体が認識する腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーに属する分子量55kDの新規細胞死受容林を同定した。この細胞死受容体は、肝、腎、脳などの卵巣以外の組織には発現していない、顆粒層細胞特異的に発現しているもので、FasやTNF受容体などの既知細胞死受容体とはことなることを証明できた。

研究成果

• [文献書誌] Miki Sugimoto et al.: "Ultrastructural changes in granulosa cells in porcineantral follicles under going atresia indicate apoptotic cell death." Journal of Reproduction and Development. 44. 7-14 (1998)
• [文献書誌] Yoshihiro Kimura et al.: "Examination of granulosa cell glycoconjugates which change during follicular atresia in the pig ovary." Journal of Reproduction and Development. 44. 35-44 (1998)
• [文献書誌] Hajime Miyamoto et al.: "Assessment of the effect of dimethyl sulfoxide on the survival of cryopreserved mouse morulae by single step exposure and rapid freezing." Theriogenology. 49. 171-172 (1998)
• [文献書誌] Maki Morita et al.: "Cell proliferation and morphology in oviductal epithelium of cycling mice." Biology of Reproduction. 56. 85-86 (1998)
• [文献書誌] Noboru Manabe et al.: "Selection of oocytes in mammalian ovaries." Tissue Culture Engineering. 25. 4-8 (1998)
• [文献書誌] Noboru Manabe et al.: "Endocrine-disrupting environmental contaminants in animal products." Clinocal Endocrinology. 46. 555-562 (1998)
• [文献書誌] Noboru Manabe et al.: "Reproductive Biology Update; Regulatory mechanisms of granulosa cell apoptosis in porcine ovarian follicle atresia." Nakanishi Pub.Co., Kyoto, Japan, 498 (1998)
• [文献書誌] Noboru Manabe et al.: "Apoptosis: Its Roles and Mechanism; Role of granulosa cell apoptosis in ovarian follicle atresia." Business Center for Academic Societies, Tokyo, Japan, 228 (1998)