| 研究課題/領域番号 |
08456145
|
|---|
| 研究機関 | 帯広畜産大学 |
|---|
研究代表者 |
品川 森一 帯広畜産大学, 畜産学部, 教授 (00001537)
|
|---|
| 研究分担者 |
桑山 秀人 帯広畜産大学, 畜産学部, 助教授 (40125399)
石黒 直隆 帯広畜産大学, 畜産学部, 助教授 (00109521)
|
|---|
| キーワード | プリオン / PrPC / in vitr o assay |
|---|
| 研究概要 |
無細胞系でPrPCからPrPScえの転換系作出のための精製PrPCの調性を検討した。前年度から引き続きPrPC精製を試みたが、組織から実験に使用可能な量を調性することに成功しなかった。
大腸菌を用いた組み換えPrPCを用いることに切換て、市販の発現ベクターを用いて組み換え体を作製している。当初、精製段階を考慮して、GSTあるいはヒスチジンタグを持った発現ベクターのプロモーターをガラクトシダーゼやアラビノース利用系のものを用いていた。しかしこれらでは発現量が低く使用に耐えなかった。そこでプロモーターをT7に変えたベクターでの構築を行ってったが、やはりそれほど目立った発現量の増加が見られなかった。
現在、効率は悪いが発現細胞からグアニジン塩による抽出物を調整し、キレートカラムクロマトによるPrPCの部分精製を繰り返し、次の精製段階のためのPrPCの蓄積を行っている。
|
