毒性試験動物代替を目指したチトクロムP-450代謝プロセスの開発

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08456155
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 数坂 昭夫 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助教授 (00002113)
• 研究分担者: 岩田 久人 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助手 (10271652) ; 藤田 正一 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (10143314)
• キーワード: 毒性試験 / 動物代替毒性試験法 / 遺伝子組み替え / 酵素機能解析 / CYPIID / イヌCYPII D15 / 海棲哺乳動物CYP1A / Sf9細胞

研究概要

チトクロムP450(CYP)遺伝子を導入したバキュロウイルスを用いて昆虫細胞に大量のCYPを発現させ、それらの動物代替毒性試験への応用を検討してきた。
そして、CYPIID分子種がヒト薬物代謝酵素として重要であること、および、イヌが実験動物として頻用されること等に注目して、イヌから単離したCYPIID15遺伝子を用いてSf9細胞にそのCYP発現を行い、そのキャラクタリゼイションを行ったこと、また、発現CYPIID分子種の酵素機能を、この酵素の典型的な基質である幾つかの薬物を用いて検討し、発現CYPがラットあるいはヒト類似の性質を持つこと、等を報告してきた。
本年度、最近海洋汚染のバイオマーカとして注目されているミンククジラ、イシイルカ、トド、ゴマフアザラシおよびクラカケアザラシ等の海棲哺乳動物肝臓に含まれるCYP(特に、CYP1A分子種)の機能解析を目的として、それら遺伝子のクローニングと塩基配列の決定を試みた。そして、これら海棲哺乳動物肝臓におけるCYP1Aの存在が明らかになった。また、現在、特にクラカケアザラシからの試料について詳しい機能解析を行っている。
成果論文投稿を準備中である。

研究成果

• [文献書誌] Ishizuka,M.et al.: "Accumulation of halogenated aromatic hydrocarbons and activities of cytochrome P450 and glutathione S-transferase in crabs(enocheir japonicus)from japanese rivers." Environmental Toxicology and Chemistry. 17. 1490-1498 (1998)
• [文献書誌] Tasaki,T.et al.: "Expression and characterization of dog CYP2D15 using baculovirus expression system1." J.Biochem.123. 162-168 (1998)
• [文献書誌] Yamamoto,Y.et al.: "Molecular basis of the dark agouti rat drug oxidation polymorphism: importance of CYP2D1 and CYP2D2." Pharmacologenetics. 8. 73-82 (1998)
• [文献書誌] Tasaki,T.et al.: "Regio- and stereoselectivity in propranolol metabolism by dog liver microsomes and the dog CYP2D151." J.Biochem.123. 747-751 (1998)
• [文献書誌] Morita,K.et al.: "Strain differences inCYP3A-mediated C-8 Hydroxylation(1,3,7-Trimethyluric acid formation)of caffeine in wistar and dark agouti rats." Biochemical Pharmacology. 55. 1405-1411 (1998)
• [文献書誌] Shimamoto,Y.et al.: "Differetial alterations in levels of hepatic microsomal cytochrome P450 isozymes following intracerebroventricular injection of bacterial lipopolysaccharide in rats." Arch Toxicol.,. 72. 492-498 (1998)