| 研究課題/領域番号 |
08456158
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
小野寺 節 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (90012781)
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| 研究分担者 |
百渓 英一 農林水産省, 家畜衛生試験場, 室長
松本 芳嗣 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (00173922)
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| キーワード | プリオン / マウス / ジーンターゲッティング / 遺伝子 / アポトーシス / プロモーター / アデノウイルス / PCR |
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| 研究概要 |
白オリックスプリオン遺伝子に特異的なプライマーを使ったPCR法によりオリックスプリオン蛋白質翻訳領域を含むDNA断片を増幅し、TA-cloning vectorにサブクローニングした。オリックスプリオン蛋白質を過剰発現するマウス作成のため、外来遺伝子の全身での発現を強力に誘導するβ-アクチンプロモーターの支配下にオリックスプリオンcDNAを組み込んだ(pActin-oPrp)(図参照)。得られるトランスジェニックマウスでは脳、免疫細胞、筋肉などを含むすべての臓器で外来遺伝子の発現が期待される。実際に我々は既にCT2(分泌蛋白)を同β-アクチンプロモーターの支配下に組み込んだトランスジェニックマウスを作成し、すべての臓器におけるCT2の発現をノーザンプロット法により確認し、さらに抗CT2モノクローナル抗体を用いたウエスタンブロット法によりトランスジェニックマウス血清中におけるCT2蛋白質の存在を確認している。完成したプラスミッド(PActin-oPrp)は制限酵素Sal IおよびHind IIIで処理され、ベクター配列が除かれた後、Gene c1ean kitを用いて精製された。現在、得られたトランスジーン断片をマイクロインジェクション法によって、BDF1マウスの受精卵に導入している。20日後には仔が生まれ、さらに4週後には成熟したマウスの尾よりDNAを回収し外来遺伝子の存在を確認する予定である。
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