幼若ホルモンリセプターと遺伝子発現調節機構

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08456171
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 鎮西 康雄 三重大学, 医学部, 教授 (60024709)
• 研究分担者: 安藤 勝彦 三重大学, 医学部, 助教授 (90024710)
• キーワード: 幼若ホルモン / シアノプロテイン / 貯蔵蛋白質 / 遺伝子発現 / 転写調節 / 転写調節因子 / cDNAクローニング / ゲルシフトアッセイ

研究概要

(自的)幼若ホルモン(JH)によって発現が調節されている体液蛋白質Cyanoprotein(CP)の遺伝子特に上流調節領域の構造解析を行ない、転写の調節に直接関わる遺伝子エレメントをゲルシフト法・無細胞転写法により明らかにすると共に、このエレメントに結合し転写調節に関わる脂肪体核因子のクローニングを行なうのが目的である。
(方法)ホソヘリカメムシのCPcDNAをプローブとして遺伝子ライブラリーから、CP遺伝子をスクリーニングする。CP遺伝子の上流域の構造解析をおこなう。CP遺伝子上流域の適当なフラグメントを作製し、脂肪体核抽出液を用いて、ゲルシフトアッセイを行なう。
(成果)ホソヘリカメムシのCP(CPa,CPb)遺伝子をクローニングし、遺伝子構造を解析した。CPaおよびCPb遺伝子はそれぞれ9.Okbと7・5kbとに広がって11のエクソンに分割されていることが判った。各遺伝子の上流約1kbのDNA構造(DNA配列)を解析した。CPa,CPb共上流-30bpにTATAboxがあった。また、上流-100から200bp付近には哺乳動物にみられるGATAモチーフ様の配列が3箇所CPa,CPbの両方にほぼ同位置存在した。CPa,CPbの発現はJHにより制御され、CPaは発現が誘導され、CPbは抑制されることがわかっているが、遺伝子上流域構造の比較の結果、かなりの違いがみとめられた。CPaの上流域-550bp、-850bp付近に核受容体スーパープァミリ-(nuclear receptor superfamily)のDNA応答配列モチーフのコンセンサス配列AGGTCAがinverted repeatとして存在するが、CPbにはそれらの配列がないことが判った。そこで、CPaだけに存在するinverted repeat配列を含むフラグメントを合成し、これをラベルしてプローブとして、脂肪体核抽出液を用いて・ゲルシフトアッセイを行った。その結果、JH処理した休眠虫に特異的なシフトが観察された。
1(結論)JHにより発現が誘導されるCPaの上流-550bp域に存在する核受容体スーパーファミリー応答配列に結合する脂肪体核因子の存在を確認した。この因子は休眠虫にJHを処理すると脂肪体核に誘導されることが判った。現在この因子のクローニングを開始している。

研究成果

• [文献書誌] Masao Yuda et al: "Identification and activities of anticoagulant in the salivary glands of the blood sucking bug,Rhodnius prolixus." Med.Entomol.Zool.,. 47. 263-272 (1996)
• [文献書誌] Jianxin Sun,et.al: "Purification,characterization and cDNA cloning of a novel anticoagulant of the intrinsic pathway,(prolixin-S),from salivary glands of the blood sucking bug,Rhodnius prolixus." Thrombosis and Haemostasis. 75. 573-577 (1996)
• [文献書誌] Masao Yuda, et al.: "cDNA cloning,expression and characterization of nitric-oxide synthase from the salivary glands of the blood-sucking insect Rhodnius prolixus." Eur.J.Biochem.242. 807-812 (1996)
• [文献書誌] Hiroyuki M.et al.,: "Induction of anti-malarial transmission blocking immunity with a recombinant ookinete surface antigen of Pasmodium berghei produced in silkworm larvae" Vaccine. 14. 120-126 (1996)
• [文献書誌] Tetsro S.et al.: "Vitellogenins and vitellins in the bean bug,Riptortus clavatus" Arch.Insect Biochem.Physiol.,. 31. 395-412 (1996)
• [文献書誌] Yukiyoshi S.et al.: "Effect of temperature to Plasmodium berghei and P.yoelii on mosquito stage in Anopheles stephensi." Jpn.J.Parasitol.,. 45. 98-104 (1996)
• [文献書誌] Miura K.et al.: "Cloning of mRNA sequences for two antibacterial peptides in a hemipteran insect,Riptortus clavatus." Zool.Sci.,. 13. 111-117 (1996)