| 研究課題/領域番号 |
08457005
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
塩田 浩平 京都大学, 医学研究科, 教授 (80109529)
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| 研究分担者 |
滝川 俊也 京都大学, 医学研究科, 助手 (90263095)
石橋 誠 京都大学, 医学研究科, 助手 (30232341)
森 千里 京都大学, 医学研究科, 助教授 (90174375)
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| キーワード | アポトーシス / プログラム細胞死 / DNA断片化 / 形態形成 / 四肢原基 / 口蓋 / マウス胎児 |
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| 研究概要 |
本年度は主としてマウス胎児を用いて形態形成におけるアポトーシス(プログラム細胞死)の役割について研究を行い、以下の成果を得た。
1)胎齢11〜15日のマウス胎児の四肢原基(肢芽)を用いて、プログラム細胞死を特異的に染色するNile blue染色を行い、アポトーシスの発現を経時的に観察した。その結果、指間部のフポトーシスは近位指間組織から始まって遠位へ拡がっていくこと、指設間でもアポトーシスが起り近位から遠位に向かって起こることが明らかになった。このことから、指間部のフポトーシスが指の分離の近位端を規定すること、ならびに指の関節の形成にもアポトーシスが必要であることが明らかになった。また、手板および足板の橈側(頸側)端と尺側(腓側)端にも強いアポトーシスが起こることが観察され、これは多指の発生を防ぐ役割を果しているのであろうと推定された。
2)本研究では、アポトーシス関連遺伝子を特異的に抑制して形態形成がどのように修飾されるかを調べることを目的としている。本年度は、胎児器官培養系におけるアンチセンスDAN法の可能性とその実験条件を設定するため、EGF受容体遺伝子に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド(アンチセンスODN)を胎児口蓋培養系に加えて組織内取り込みとその口蓋形成に対する影響を調べた。その結果、至適ODN濃度は5μM前後の濃度であり、10μM以上の濃度では非特異な毒性(壊死など)が発現することが明らかになった。また、5μM濃度下では、ODNが培養器官の組織中に取り込まれ、EGF受容体蛋白の合成を有意に抑制することが明らかになった。
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