研究課題/領域番号 |
08457032
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研究種目 |
基盤研究(B)
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研究機関 | 弘前大学 |
研究代表者 |
遠藤 正彦 弘前大学, 医学部, 教授 (20004616)
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研究分担者 |
棟方 秀和 弘前大学, 医学部, 助手 (80271807)
中村 敏也 弘前大学, 医学部, 講師 (00155847)
高垣 啓一 弘前大学, 医学部, 助教授 (70163160)
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キーワード | 人工プロテオグリカン / ヒアルロニダーゼ / 糖転移反応 / 糖鎖の組み換え / コンドロイチン硫酸 / ヒアルロン酸 / 酵素的糖鎖合成 / 細胞外マトリックス |
研究概要 |
目的:細胞外マトリックスを構成しているプロテオグリカンの、インビトロにおける完全組み換え体の酵素による合成法の確立を目標とした。このために、グリコシダーゼの持つ糖転移反応を利用してた。 実験方法:酵素として市販の牛精巣性ヒアルロニダーゼ(Hyase)を更に精製した。受容体として、コンドロイチン硫酸及びヒアルロン酸のHyase消化によって得られる各種のオリゴ糖を調製した。これらを、トリス-塩酸緩衝液(pH7.0)で37℃インキュベートし、その反応生成物を、高速液体クロマトグラフィ及び、質量分析装置により測定した。 結果と考察 1.糖鎖の受容体及び供与体としては、コンドロイチン硫酸及びヒアルロン酸が効果的であった。これらを任意に組み合わせると、コンドロイチン硫酸群糖鎖とヒアルロン酸糖鎖の任意の配列の糖鎖を酵素的に合成することが可能になった。また、培養細胞の産生した4-メチルウンベリフェリル-キシロシドに伸長した糖鎖は、糖鎖の良い受容体であり、これはペプチド中のセリン残基に糖鎖を導入するときの優れたキャリヤ-であることが明らかになった。 これらの方法を基にすると、人工プロテオグリカンの酵素的合成の道が拓かれたことなる。
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