標的遺伝子組み替えによる血小板活性化因子受容体機能の解析

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08457033
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 清水 孝雄 東京大学, 医学部, 教授 (80127092)
• 研究分担者: 粂 和彦 東京大学, 医学部, 助手 (30251218) ; 和泉 孝志 東京大学, 医学部, 助手 (70232361)
• キーワード: 血小板活性化因子 / 標的遺伝子組み換え / エンドトキシンショック / アナフィラキシ-

研究概要

血小板活性化因子(PAF)はリン脂質性のメディエーターであり、炎症やアレルギー反応などに深く関与していると考えられている。PAFの機能を明らかにする目的で、PAF受容体の欠損マウスを作製した。マウスのPAFゲノムをクローニングし、受容体の翻訳領域にポジティブセレクションマーカーとしてネオマイシン耐性遺伝子を挿入し、受容体構造を破壊し、また、ネガティブセレクションにはチミジンキナーゼを用いた。ES細胞のスクリーニングから、ブラストシスト注入を経て、最終的に数ラインのマウスを得た。現在、その表現形を解析している途中であるが、マウスは正常に生殖をし、出産すること、また、発達や臓器形成などに大きな異常は存在しないこと、さらに血圧や血球数などにも変化の無いことが明らかとなった。しかしながら、卵白アルブミン感作などによるアレルギー誘発試験で野生型とノックアウトマウスは顕著な差を示した。これらの詳細については、現在解析中であり、次年度に報告の予定である。

研究成果

• [文献書誌] Mutoh,H.: "Tissue-specific response of the human platelet-activating factor receptor gene to retinoic acid and thyroid hormone by alternative promoter usage." Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93. 774-779 (1996)
• [文献書誌] Yokomizo,T.: "cDNA cloning,expression,and mutagenesis study of leukotriene B4 12-hydroxydehydrogenase." J.Biol.Chem.271. 2844-2850 (1996)
• [文献書誌] Waga,I.: "Microtrap phosphorylation assay of mitogen-activated protein(MAP)kinases,to detect their activation by lipopolysaccharide." J.Immunol.Method. 190. 71-77 (1996)
• [文献書誌] Mori,M.: "Predominant expression of platelet-activating factor receptor in the rat brain microglia." J.Neurosci.16. 3590-3600 (1996)
• [文献書誌] Kishimoto,S.: "Regulation by IL-5 of expression of functional platelet-activating factor receptors on human eosinophils." J.Immunol.157. 4126-4132 (1996)
• [文献書誌] Ishii,S.: "Bronchial hyperreactivity,increased endotoxin lethality,and melanocytic tumorigenesis in transgenic mice overexpressing platelet-activating factor receptor." EMBO J.16. 133-142 (1997)