ヒト胎児性癌細胞から得られた新たな分化関連分子の機能の解明と診断・治療への応用-新たに単離された分化初期関連遺伝子EATの機能解析を中心に-

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08457066
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 慶応義塾大学
• 研究代表者: 秦 順一 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (90051614)
• 研究分担者: 山田 健人 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (60230463) ; 梅澤 明弘 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (70213486)
• キーワード: ヒト胎児性癌細胞 / EAT遺伝子 / G3細胞 / Bcl-2 / 10(1)細胞 / モノクローナル抗体 / 胚細胞腫瘍 / CDDP

研究概要

われわれが独自に樹立した多分化能ヒトEC細胞G3細胞を用いて本年度は以下の成果を得た.
I.ヒトEC細胞分化関連分子EAT遺伝子の機能解明
1)EAT遺伝子導入マウスを2系統を得た.これらのマウスの一部には肥満細胞の白血病化が認められた.また,多くのマウスで病的な肝脂肪変性を見た.これらの詳細な解析が来年度の課題である.
2)p53を欠くマウス線維芽細胞である10(1)細胞を用いて本遺伝子のstable導入系を樹立した.同細胞に対してcis-Diamine platinum(CDDP)を作用させた結果,同剤によるアポトーシスを有意に抑制した.本遺伝子が機能的にもBcl-2に匹敵することが明らかとなった.
3)EAT遺伝子の組み替え体(EAT)を用いて2種のマウスモノクローナル抗体を作成した.本抗体を用いてヒト胎児および正常組織におけるEATの分布を免疫組織学的に検討した.その結果,気管上皮,導管上皮などの単層上皮とリンパ網内系組織に発現が認められた.
II.G3細胞から得た細胞膜を認識する分子の機能解析と病態診断,治療への応用
1)精巣胚細胞腫瘍の前癌病変であるintratubular malignant germ cellと分化初期の精細胞,卵細胞を特異的に認識するHB5,HF2,HE11抗体を得た.これらの抗体は新たながん胎児抗原を認識しており,抗原の単離と遺伝子クローニングが来年度の課題である.抗体の認識する抗原の決定.
2)胎児性癌を特異的に識別する4C4抗体を用いて,胎児性癌と病態の異なる他の胚細胞腫瘍を識別する病理組織診断.細胞診の確立がなされ,本抗体が広く一般の検査室で用いられる段階に至った.

研究成果

• [文献書誌] Yamada,T.,Hata,J.: "Apoptosis of human embryonal carcinoma cells with in vitro differentiation" Cell Structureand Function. 21. 53-61 (1996)
• [文献書誌] Urano,F.,Hata,J.: "The novel chimera gene between EWS and E1A-F encoding the adenovirus E1A enhancer-binding protein in extraosseous Ewing's sarcoma" BBRC. 219. 608-612 (1996)
• [文献書誌] Maruyama,T.,Hata,J.: "Heat shock induces differentiation of human embryonal cacinoma cells into trophoectodermal lineages,Exp" Cell Res. 224. 123-127 (1996)
• [文献書誌] Umezawa,A.,Hata,J.: "Involvement of mcll/EAT,Bcl-2 related gene,in differentiation of human embryonal carcinoma cells" Cell Structure and Function. 21. 143-150 (1996)
• [文献書誌] Hata,J-i.et al.: "A comparative analysis of cell surface antigens expressed by cell lines derived from human germ cell tumors" Int J Cancer. 66. 806-816 (1996)
• [文献書誌] Hiraoka,N.,Hata,J.: "Establishment of three monoclonal antibodies specifc for human developing prospermatogonia and intratubular germ cells(ITMGCs)(in press)" Lab Invest. (1997)