C型肝炎ウイルスのin vitro増殖系の樹立とその基礎応用

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08457067
• 研究機関: 日本大学
• 研究代表者: 内田 俊和 日本大学, 医学部, 助教授 (80060078)
• 研究分担者: 杉谷 雅彦 日本大学, 医学部, 講師 (40187654)
• キーワード: C型肝炎 / B型肝炎 / サイレントB / 肺炎ウイルス / トランスフェクション

研究概要

我々はhepatitis C virus(HCV)に血清マーカー陰性(HBsAg陰性・サイレント)のhepatitis B virus(HBV)が高頻度(おそらく全て)に重感染している事実を発見した。HCVにサイレントHBVが高頻度に重感染しているということは、たまたま二つのウイルスが同じ経路でひとりの肝臓に感染したというのではなく、ウイルスの増殖にとってもうひとつのウイルスの存在が必要だということを意味していると想定される。その場合、サイレントHBVのみに感染し発病している患者が存在するため、サイレントHBVがHCVの感染と増殖に必要であると仮定された。そこでこのサイレントHBV DNAをクローニングし、複製可能なhead-to-tail dimerを作製し、HCV RNAとともにヒト肝細胞癌由来の樹立細胞株であるHuH-7細胞にin vitroで同時トランスフェクションし、培養上清中に分泌されるHCV RNAを定量した。コントロールとして、HCV RNAのみのトランスフェクション、HCV RNAと野生株(HBsAg陽性)HBV DNAの同時トランスフェクションを用意した。その結果、サイレントHBV DNAとのトランスフェクションはHCV RNA単独に較べ5倍までHCV RNA分泌量が多く、逆に野生株HBV DNAは同時にトランスフェクションした HCV RNAの分泌をHCV RNA単独に較べ8倍まで抑制した。この後者の現象はウイルスの相互干渉として通常観察されることである。これに対し、サイレントHBV DNAはHCV RNAの複製と発現を亢進していることが強く示唆され、この方面の今後の研究の基礎が築かれたことになる。

研究成果

• [文献書誌] Shrestha SM,Okuda K,Uchida T,et al: "Endemicity and clinical picture of liver disease due to obstruction of the hepatic portion of the inferior vena cava in Nepal" J.Gastroenterol.Hepatol.11. 170-179 (1996)
• [文献書誌] Uchida T,Saitoh T,Shinzawa H: "Mutations of the X region of hepatitis B virus and their clinical implications." Pathol.Int.47. 183-193 (1997)
• [文献書誌] Uchida T,Kaneita Y,Gotoh K,et al.: "Hepatitis C is frequently coinfected with serum markernegative hepatitis B virus" J.Med.Virol.52. 399-405 (1997)
• [文献書誌] Yamagoe S,Akasaka T,Uchida T,et al.: "Expression of a neutrophil chmotatic protein LECT2 in human hepatocytes revealed by immunohistochemical studies using polyclonal and monoclonal antibodies" Biochem.Biophys.Res.Commun.237. 116-120 (1997)
• [文献書誌] Li T-C,Yamakawa Y,Uchida T,et al.: "Expression and self-assembly of empty virus-like particles of hepatitis C virus" J.Virol.71. 7207-7213 (1997)