胃上皮細胞から産生される増殖調節因子の検索

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08457161
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 群馬大学
• 研究代表者: 立元 一彦 群馬大学, 生体調節研究所, 教授 (60240694)
• 研究分担者: 誉田 芳孝 群馬大学, 生体調節研究所, 講師 (90261867) ; 石川 巧一 群馬大学, 生体調節研究所, 助教授 (80143238)
• キーワード: 胃上皮細胞 / RGM-1細胞 / 増殖調節因子 / 分化誘導因子 / 蛋白質因子 / 抽出精製 / 生化学的解析 / 構造決定

研究概要

本研究では、初代培養ラット胃上皮細胞RGM-1の条件培養液を大量に調製し、培養液中に分泌される蛋白質の生化学的解析を通じて各種の増殖調節因子等の同定を行ない、また、分離精製された蛋白質因子を用いて、これらの因子の胃上皮細胞における増殖、分化、修復や形態形成に関する生理的役割を検討することを目的としている。我々は、胃上皮細胞RGM-1を多数の大型培養フラスコ中で培養し、さらに無血清培養液中で3-4日間培養することにより条件培養液を調製した。その条件培養液は分子濾過法により濃縮され、分子量に応じて分画された後、イオン交換クロマトグラフ法、さらにHPLCおよびSMARTなどの液体クロマトグラフ装置を用いて精製された。それぞれの精製段階において主要蛋白質はSDS-PAGEなどの電気泳動法により検出された。単離された蛋白質の化学構造は、アミノ酸配列決定機により部分アミノ酸配列を決定し、コンピューターによるホモロジー検索にかけられた。既知の物質とホモロジーがある場合は、レーザイオン化質量分析装置等を用いて分子量が測定された。その結果、50-100種類の蛋白質因子およびそれらのフラグメントが単離された。現在、それらの物質の構造解析が進行中であるが、RGM-1細胞の条件培養液中には、IGF-2、IGFBP-2、SPARC、β2-microglobulinなどが多量に存在することがすでに見いだされている。IGF-2、IGFBP-2、SPARC、β2-microglobulinなどは、増殖、蛋白合成などに関与していると云われていることから、我々の研究によって胃上皮細胞の増殖や修復にもこれらの蛋白質因子が関与している可能性が示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Ma,H-T.: "Effects of pancreastatin and somatostatin on secretagogues-induced rise in intracellular free calcium in single rat pancreatic islet cells." Regulatory Peptides. 61. 143-148 (1996)
• [文献書誌] Kato,M.: "GLP-1 depolarizes the rat pancreatic b-cells in a Na+ dependent manner." Regulatory Peptides. 62. 23-27 (1996)
• [文献書誌] Saito,Y.: "Effects of bradykinin on the intracellular calcium concentration of pancreatic acinar AR42Jcells." Life Sciences. 18. 1569-1574 (1996)
• [文献書誌] Saito,Y.: "Bradykinin increases intracellular free Ca+ concentration and promotes insulin secretion in the clonal B-cell line,HIT-15 cells." Biochem. Biophys. Res. Commun.221. 577-580 (1996)
• [文献書誌] Herzig,K-H.: "Diazepam binding inhibitor is a potent cholecystokinin releasing peptide in the intestine." Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93. 7927-7932 (1996)
• [文献書誌] Ishimaru,H.: "Activation of ion handling system within the gerbil hippocampus after cerebral ischemia." Brain Research. 726. 23-30 (1996)