| 研究概要 |
潰瘍性大腸炎の炎症性粘膜に活性化好酸球が多数浸潤し、eosinophil cationic protein(ECP)を遊離し粘膜障害を惹起している可能性をこれまでに報告してきた。このECPの組織障害機構を明らかにするために、ECPの抽出精製を行った。純度の高いECPの抽出精製に成功し、つぎに、腸管平滑筋の収縮作用があることを見出し、今年度は、その収縮機構を追求した。[方法]1、ECP精製:Peterson(1988年)らの方法に準じて抽出精製した。(1)白血球を分離、粉砕し顆粒を分離、濃縮、(2)カラム精製:(1)分子ふるいクロマトグラフィー(Superdex75p.g.,φ26×600mm)、(2)イオン交換クロマトグラフィー(SOURCE,φ10×100mm),(3)Zn-キレートクロマトグラフィー(Chelating Sepharose,φ5×100mm)の精製過程で行った。2.腸管平滑筋収縮作用:(1)モルモット小腸条片(約2cm)をマグヌス装置に懸垂し、0.6gの負荷をかけて等長性に小腸片の収縮性を測定し、(2)アトロピンによる収縮抑制実験を行った。[結果]1.ECP精製:電気泳動で16kD〜21.4kDの分子領域に存在する活性値の高いECPのピークを獲得することができた。2.腸管平滑筋収縮作用:(1)10μg/l濃度のECPによって一過性の収縮を認めた。これは基準物質であるアセチルコリンの収縮高の13%〜16%の収縮作用であった。(2)このECPによる収縮は一部アトロピンで抑制された。したがってECPがアセチルコリン受容体に結合するのか、あるいはコリン作動性神経に働いてアセチルコリン遊離を促進し収縮を起こしている可能性が考えられた。
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