| 研究概要 |
1.ヒト副甲状腺過形成における細胞機能の解析
手術にて摘除したヒト副甲状腺の連続切片で,ビタミンD受容体(VDR)と核増殖抗原(PCNA)の免疫染色を行った.VDRの減少の著しい結節性過形成では,びまん性過形成に比べて,PCNA陽性細胞数が著明に増加していた.またVDRとPCNAの陽性率は有意な負の相関を示し,びまん性過形成の中にみられる小さな結節では周囲に比べてVDRが減少しPCNA陽性細胞が増加していた.したがって,VDRの減少が細胞増殖に直接関連していることが示唆された.
2.副甲状腺細胞に対するアデノウイルスを用いた遺伝子導入実験
β-galctosidaseを発現するアデノウイルススベクターを,in vitro,in vivoで副甲状腺細胞に感染させる予備実験を行った.In vitroの系では,副甲状腺の確立した継代培養細胞がないので,ヒト手術摘出副甲状腺の初代培養細胞に対してβ-galctosidaseを発現するウイルスを48時間感染させ,X-gal染色を行い,遺伝子導入効率を検討した.また,細胞外カルシウムの変化に対する副甲状腺ホルモン(PTH)の分泌能が,ウイルス感染そのもの変化しないことを確認した.In vivo感染実験は,ラットの手術的に露出した副甲状腺に直接注入し,48時間後に再び副甲状腺を摘出して切片を作成し,X-gal染色を行い,遺伝子が導入されたことを確認した.
また,これらに並行して,COS-TCP法を用いて,VDRおよびカルシウム受容体遺伝子を発現する組み換えアデノウイルスの作成を行った.
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