| 研究課題/領域番号 |
08457293
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
田口 喜雄 東北大学, 留学生センター, 教授 (70004885)
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| 研究分担者 |
土井 秀之 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (90188839)
大河内 信弘 東北大学, 医学部, 講師 (40213673)
西平 哲郎 東北大学, 医学部, 助教授 (50101142)
里見 進 東北大学, 医学部, 教授 (00154120)
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| キーワード | 肝硬変 / 肝細胞移植 / レーザー / アンチセンス / 遺伝子導入 |
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| 研究概要 |
1.肝硬変モデル:前年度までにマウス、ラットに四塩化炭素を長期投与、硬変肝モデルを作製し、硬変肝モデルを用いて70%肝切除では生存し得ないことを明らかにした。上記の硬変肝作製過程ならびに、四塩化炭素中止後3か月間経時的に血液をサンプリングし肝繊維化の律速酵素の一つであるハイドロオキシ・プロリル・デハドロゲナーゼの酵素活性を測定し、硬変肝の作成過程で硬変肝の程度とハイドロオキシ・プロリル・デハドロゲナーゼの活性が相関して増加することを明らかにした。またマウス胎児肝細胞の分化誘導実験をおこない、この胎児肝細胞株が肝の上皮系細胞に分化することを明らかにした。しかし、四塩化炭素を長期投与による硬変肝モデルは肝実質細胞障害が強くヒト肝硬変モデルとしては適さないため、新たにジメチルニトロソアミン投与による肝硬変モデルの作製を行なっている。
2.増殖性肝細胞の作製:前年度は移入細胞作製のために新たにレーザー光による選択的細胞融合装置を設計、試作し、細胞のトラッピングの条件、融合のためのパルスの波長、照射時間を検討した。ミエローマ細胞とリンパ球を用いた融合実験では20〜30%の確立で融合が成功し、HAT selectionにて融合細胞がoriginalのミエローマ細胞とリンパ球の両者の性格を持っていることを確認した。加えて、マウス肝実験細胞とマウス・ミエローマ細胞との至適合条件を検討し、増殖性肝細胞の作製に成功した。現在この増殖性肝細胞の肝細胞としての性格を検討中である。
3.アンチ・センスによる細胞機能制御:遺伝子操作を行うためのmRNAのアンチ・センスをいれるHVJリポゾームの製作に取り掛かった。均一な大きさのリン脂質のリポゾームの作成、センダイ・ウィルスの紫外線による不活化などの作業を行なった。現在TNFのmRNAのアンチ・センスを用いて、肝灌流モデルにおいて実質細胞、非実質細胞のどちらに遺伝子導入がなされるか検討中である。ラット・マクロファージ細胞では18と36のベース・ペア-のアンチ・センスを用いてTNF-αの産生抑制実験を行ない、18ベース・ペア-のアンチ・センスを用いるとTNF-αの産生が%まで抑制される事を明らかにした。現在、灌流肝出同様の実験を行なっている。
4.細胞遺伝し導入方法の開発:ヒト肝癌細胞株に対して、Lac-Z遺伝子の導入・β-galactosidase発現をレーザー照射装置を用いて効率のよい導入条件を検討中である。
今後の課題:コラゲナーゼ・インヒビターのmRNAの分析、このmRNAに対するアンチセンス・クレオチドの合成に関する研究が遅れており、この二つに関する研究は今後に持ち越された。
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