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前年度までに酸化ストレスタンパクに関して(1)A170タンパク質をコードするcDNA全長の決定(2)A170タンパク質組み換え体と抗体の製作(3)A170タンパク質およびmRNAレベルのストレス応答の解析(4)細胞内A170の局在の確認(5)A170をリン酸化するキナーゼの検出(6)MSP23のラットホモローグのクローニング等の結果を得た。
今年度はより発展させ、A170については(1)A170をリン酸化するキナーゼの同定をおこない、A170がプロテインキナーゼA、マップキナーゼ、カゼインキナーゼIIでリン酸化され、プロテインキナーゼCではリン酸化しないことを確認し、(2)ゲル内リン酸化法によってえられるリン酸化酵素が、分子サイズ、抗体との交差性、薬理学的特性からカゼインキナーゼIIであることを示した。また、(3)誘導の仕組みがユビキチンプロテオソーム系等の転写後の調節をうけていること可能性を示した。さらには、(4)ラットによる虚血モデルをつかい脳虚血によるA170の誘導を調べた。
一方、前年度に製作された抗体を用いて臨床への応用を検討し、(5)酸化ストレスタンパクと手術標本での発現をしらべA170およびヘムオキシゲナーゼは健常部位では発現はみられなかったが、MSP23は健常組織で一部発現していることが確認された。さらに(6)腫瘍組織の関係も調べたところ、A170およびヘムオキシゲナーゼは、発現の確認はできなかったが、MSP23については癌組織における発現の程度が異なることが観察された。また、(7)これらのタンパクの制御が特定の転写因子によってなされていることをノックアウトマウスをもちいた実験で確認した。
以上の結果より、次年度の研究の基礎とする。
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