1997 年度実績報告書

MAbを用いたアフィニティーカラムの作成と迅速単離法の確立及び光学分割への応用

研究課題

研究課題/領域番号	08457586
研究機関	九州大学
研究代表者	正山征洋九州大学, 薬学部, 教授 (70037604)
キーワード	MAb / アフィニティーカラム / フォルスコリン / 大麻成分 / TLC-Immunostaining / ステロイダルアルカロイド配糖体
研究概要	高分子化合物に対するMAbに比べ低分子化合物のMAbの研究は、モルヒネ等の重要な医薬品を除いては殆どなされていないのが現状である。よって本研究では有機化学領域においてMAbの機能拡大をはかることを目的としている。本研究で対象としたのはアデニールシクラーゼを特異的に活性化するフォルスコリンと、近年脳とマクロファージからレセプターが精製され、神経免疫作働活性を有すると考えられている大麻成分の活性成分、THC等である。フォルスコリンはアシメ炭素を8ケ持つために不斉合成は不可能と目され、植物資源(Coleus forskohlii)に依存するか、合成品の光学分割の手段を取らざるを得ないと考えられる。また、C.forskohliiにはフォルスコリン以外にも数多くのラブダン型異性体を含有するためその精製には多大の労力を必要とする。よってMAbを活性化アガロースゲルと結合しアフィニティーカラムを作成し粗抽出エキスからフォルスコリンのワンステップ単離法を確立した。一方、抗THC MAbはノンスペシフィックな事が明きらかとなった。これを用いて植物培養細胞による大麻成分の変換反応研究において代謝生成物の一斉検出法を構築した。検出された新大麻成分である代謝生成物の構造を各種器機分析により解明した。また、ステロイダルアルカロイド配糖体、ソラマルジンやデバイン、コデイン等の阿片アルカロイドに対するMAbも作成し、ステロイダルアルカロイド配糖体については全く新しいTLC-immunostaining法を開発した。抗フォルスコリン及び抗ソラマルジンMAb産生ハイブリドーマを用いて可変部分のDNAをクローニングし、小型化MAbを大腸菌にて大量に生産するシステムを構築したのでこれらを用いてアフィニティーカラムのキャパシティーを上昇させるべく検討している。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] H.Tanaka et al: "A simple determination of steroidal alkaloid glycosides by thinlayer chromotography immunostoining using monoclonal antibody agoinst solamargine" FEBS Letters. 404. 279-282 (1997)
[文献書誌] M.Ishiyama et al: "Production of monoclonal antibodies and development of an ELSA for solamargine" Cytotechnology. 18. 153-158 (1996)
[文献書誌] H.Yanagihara et al: "Immunoaffinity column chromatography against forskolin using an antiforskolin monocolnal antibody and its application" Analytica Chimica Acta. 335. 63-70 (1996)
[文献書誌] H.Yanagihara et al: "Ropid analysis of small Samples containing forskolin using monoclonal antibodies" Planta Medica. 62. 169-172 (1996)
[文献書誌] H.Tanaka et al: "Monoclonal antibody based enzyme immunoassay for marihuana(Cannabinoid)compounds" Jounal of Immunoassay. 17(4). 321-342 (1996)
[文献書誌] H.Tanaka et al: "Cannabis 25,biotransformation of cannabidiol and cannabidiolic acid by pinellia ternata tissue segments" Plant Cell Reports. 15. 819-823 (1996)
[文献書誌] R.Sakata et al: "Animal Cell Technology:Basic & Applied Aspects" Kluwer Academic Publishers, 6 (1997)

1997 年度 実績報告書

MAbを用いたアフィニティーカラムの作成と迅速単離法の確立及び光学分割への応用

研究代表者

正山 征洋 九州大学, 薬学部, 教授 (70037604)

研究成果

[文献書誌] H.Tanaka et al: "A simple determination of steroidal alkaloid glycosides by thinlayer chromotography immunostoining using monoclonal antibody agoinst solamargine" FEBS Letters. 404. 279-282 (1997)

[文献書誌] M.Ishiyama et al: "Production of monoclonal antibodies and development of an ELSA for solamargine" Cytotechnology. 18. 153-158 (1996)

[文献書誌] H.Yanagihara et al: "Immunoaffinity column chromatography against forskolin using an antiforskolin monocolnal antibody and its application" Analytica Chimica Acta. 335. 63-70 (1996)

[文献書誌] H.Yanagihara et al: "Ropid analysis of small Samples containing forskolin using monoclonal antibodies" Planta Medica. 62. 169-172 (1996)

[文献書誌] H.Tanaka et al: "Monoclonal antibody based enzyme immunoassay for marihuana(Cannabinoid)compounds" Jounal of Immunoassay. 17(4). 321-342 (1996)

[文献書誌] H.Tanaka et al: "Cannabis 25,biotransformation of cannabidiol and cannabidiolic acid by pinellia ternata tissue segments" Plant Cell Reports. 15. 819-823 (1996)

[文献書誌] R.Sakata et al: "Animal Cell Technology:Basic & Applied Aspects" Kluwer Academic Publishers, 6 (1997)

1997 年度実績報告書

正山征洋九州大学, 薬学部, 教授 (70037604)