| 研究課題/領域番号 |
08458174
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生物有機科学
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| 研究機関 | 横浜国立大学 |
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研究代表者 |
栗原 良枝 横浜国立大学, 教育人間科学部, 教授 (90017715)
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| 研究分担者 |
原田 繁春 東京大学, 薬学部, 助教授 (80156504)
大谷 裕之 横浜国立大学, 教育人間科学部, 講師 (30213763)
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| 研究期間 (年度) |
1996 – 1997
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| キーワード | ミラクリンcDNA / 酵母における発現 / クルクリン二量体 / 大腸菌における発現 |
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| 研究概要 |
1 ミラクリンの大腸菌、酵母、タバコにおける発現
(1)大腸菌、酵母を宿主として、チオレドキシン-ミラクリン融合タンパク質、ミラクリン成熟体タンパク質の発現を試み、それぞれ抗血清ミラクリンと交差反応を示すタンパク質が得られた。初めて糖鎖のある組換えミラクリンを得ることに成功した。発現した組換えミラクリンはいずれも活性が認められなかった。
(2)ミラクリンcDNAをタバコ遺伝子中に導入した結果、破砕液上清に、抗ミラクリン血清と交差反応を示すタンパク質の発現を確認した。
2 クルクリンの大腸菌における発現
大腸菌を宿主として、マルトース結合タンパク質-クルクリン融合タンパク質およびチオレドキシン-クルクリン融合タンパク質の発現を試みた結果、いずれも菌体破砕液の上清に、抗クルクリン血清と交差反応を示すタンパク質の発現を確認した。しかし、これらのタンパク質には活性がみとめられなかった。
3 マビンリンの大腸菌における発現
マビンリンII cDNAをpET-15bのもつヒスチジンタグ遺伝子の下流に組み込み、大腸菌において融合タンパク質の発現を試み、活性を持つタンパク質が得られた。
4 マビンリン同族体の熱安定性と構造の比較
熱に安定な同族体および熱に不安定な同族体の加熱前後の立体構造の変化をCDスペクトルを測定した。その結果、マビンリン同族体の熱安定性の差異は、これらのα-ヘリックス構造の安定性の差に原因することが明らかになった。
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