1996 年度実績報告書

基本転写印紙TFIIEとTFIIHによる転写の多段階制御と細胞周期への関与の研究

研究課題

研究課題/領域番号	08458198
研究種目	基盤研究(B)
研究機関	大阪大学
研究代表者	大熊芳明大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (70192515)
研究分担者	前川隆文大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (90273721) 益谷央豪大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (40241252)
キーワード	基本転写因子 / 転写 / TFIIE / TFIIH / 細胞周期 / CAK / キナーゼ
研究概要	1.無細胞転写再構成系の構築まず転写再構成系を構築した。PolII、TFIID、TFIIHは、ヒトHeLa細胞から精製し用いるため、この細胞の大量培養システムを確立した。細胞核抽出液は、米国Roeder研のものと同程度の転写活性を示した。一方、基本転写因子TFIIB、IIE、IIF及びTFIIDのTATA結合因子TBPは、大腸菌で発現後、精製した。 2.TFIIEβの機能-活性解析 TFIIEは、TFIIHの活性制御以外に転写が開始される際に機能すると考えられる。この可能性の検討のため、TFIIEの34kDaサブユニットTFIIEβの解析をN末、C末から削った変異体及び内部欠失変異体を作成し、検討した。その結果、N末の50アミノ酸を削っても転写活性は影響を受けず、C末から13個削るとまだ活性は見られるが野生株の10%以下となった。次にTFIIEβがどの基本転写因子と結合するかを調べたところ、TFIIBとTFIIFβと強く結合することが明らかとなったので、TFIIEβ内のこれらの因子の結合領域を解析した。その結果、両者は共にC末端近傍の塩基性領域(アミノ酸257番-277番目)に結合した。TFIIEβは、プロモーター上の転写開始点上流-14から-2という二本鎖DNAの開裂がまさに起こる領域へ結合することが示されているが、上記結果を総合すると-14付近でC末端を上流側に向けてTFIIB、TFIIFβと結合すると考えられる。 3.TFIIHのCAK成分解析細胞周期で特にG1期からS期への移行の際にTFIIHの成分CAKキナーゼは、Cdk7、サイクリンH、MAT1のサブユニットよりなり、サイクリン依存性キナーゼ(CDK)をそのインヒビター(CDKインヒビター)群と共に制御すると考えられる。そこでこれらの蛋白質の発現と転写活性の細胞周期に伴う動向を調べるため、まずこれらを大腸菌内で産生させ、精製して、抗体を調製した。今後、これらを用いた転写と細胞周期の制御との関連の解析を進める。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Kawakami,K.et al.: "Characterization of the cove promoter of the Na^+/K^+-ATPase α 1 subunit gene." Euv.J.Biochem.237. 440-446 (1996)
[文献書誌] Kojima,S.et al.: "Transcriptional activation domain of human BTEB2,a GC box-binding factor." J.Biochem.121. 389-396 (1997)
[文献書誌] Ito,K.et al.: "C-Jun stimulates origin-dependent DNA unwinding by polymavirus large Tantigen." EMBO J.15. 5636-5646 (1996)
[文献書誌] Sugasawa,K.et al.: "HHR23B,a human rad 23 homolog,stimulates XPC protein in nucleotide excision repair in vitro" Mol.Cell.Biol.16. 4852-4861 (1996)
[文献書誌] Maekawa,T.et al.: "A cell-free system of Tn3 transposition and transposition immunity" Genes to Cells. 1. 1007-1016 (1996)
[文献書誌] Maekawa,T.et al.: "Specific nicking at the 3′ends of the terminal inverted repeat sequences in transposon Tn3 by transposase and an E.coli protein ACP." Genes to Cells. 1. 1017-1030 (1996)

1996 年度 実績報告書

基本転写印紙TFIIEとTFIIHによる転写の多段階制御と細胞周期への関与の研究

研究代表者

大熊 芳明 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (70192515)

研究成果

[文献書誌] Kawakami,K.et al.: "Characterization of the cove promoter of the Na^+/K^+-ATPase α 1 subunit gene." Euv.J.Biochem.237. 440-446 (1996)

[文献書誌] Kojima,S.et al.: "Transcriptional activation domain of human BTEB2,a GC box-binding factor." J.Biochem.121. 389-396 (1997)

[文献書誌] Ito,K.et al.: "C-Jun stimulates origin-dependent DNA unwinding by polymavirus large Tantigen." EMBO J.15. 5636-5646 (1996)

[文献書誌] Sugasawa,K.et al.: "HHR23B,a human rad 23 homolog,stimulates XPC protein in nucleotide excision repair in vitro" Mol.Cell.Biol.16. 4852-4861 (1996)

[文献書誌] Maekawa,T.et al.: "A cell-free system of Tn3 transposition and transposition immunity" Genes to Cells. 1. 1007-1016 (1996)

[文献書誌] Maekawa,T.et al.: "Specific nicking at the 3′ends of the terminal inverted repeat sequences in transposon Tn3 by transposase and an E.coli protein ACP." Genes to Cells. 1. 1017-1030 (1996)

1996 年度実績報告書

大熊芳明大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (70192515)