1996 年度実績報告書

細胞分裂後期に特異的に活性化されるCFキナーゼの精製及び遺伝子クローニング

研究課題

研究課題/領域番号	08458234
研究種目	基盤研究(B)
研究機関	愛知県がんセンター
研究代表者	稲垣昌樹愛知県がんセンター, 生化学部, 室長 (30183007)
研究分担者	稲垣直之愛知県がんセンター, 生化学部, 主任研究員 (20223216)
キーワード	細胞周期 / 細胞質分裂 / 中間径フィラメント / キナーゼ / リン酸化ペプチド抗体 / 低分子量GTP結合蛋白質 / 蛋白質リン酸化反応
研究概要	細胞骨格の一種である中間径フィラメントは、アクチンフィラメントや微小管に比べて安定な繊維構造を形成すると考えられてきたが、そのin vitro再構成系での実験から、様々なキナーゼが部位特異的にリン酸化することにより、そのフィラメント構築が脱重合することが明かとなった。また、最近の知見の集積から、細胞内においても各種のシグナル伝達経路の最終ステップの一つとして、部位特異的リン酸化による中間径フィラメント構築の崩壊・再構成とそれに伴う細胞形態の変化が起こっている可能性が高まりつつある。我々は本年度の研究において、中間径フィラメント構成蛋白質・グリア酸性蛋白質(GFAP)のSer-13とSer-34のリン酸化状態を特異的に認識するモノクローナル抗体を作製した。これらの抗体を用い培養グリオーマ細胞におけるGFAPのリン酸を解析したところ、細胞分裂後期および終期に分裂溝(cleavage furrow)のGFAPで未知のキナーゼ(CFキナーゼ)によって両セリンのリン酸化が生じることが明かとなった。また、分裂後期の細胞抽出液中にCFキナーゼ活性を検出した。さらに、CFキナーゼが低分子量GTP結合蛋白質Rhoによって制御されるキナーゼ(Rhoキナーゼ)に類似するという知見も得た。この酵素(CFキナーゼ)は明らかに既知のcdc2キナーゼとは異なる時期に活性化されることからその分子同定により細胞増殖の理解が一層深まると考えられる。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Sekimata,M.,Tsujimura,K.,and Inagaki,M. et al.: "Detection of protein kinase activity specifically activated at metaphase-anaphase transition." J.Cell Biol.132. 635-641 (1996)
[文献書誌] Takai,Y.,Ogawara,M.,and Inagaki,M.et al.: "Mitosis-specific phosphorylation of vimentin by protein kinase C coupled with reorganization of intracellular membranes." J.Cell Biol.133. 141-149 (1996)
[文献書誌] Tsujino,S.,Sekimata,M.,and Inagaki,M.et al.: "Primary structure of ligth and heavy chain variable regions of antibodies recognizing phosphorylated vimentins." Biochem.Biophys.Res.Commun.219. 633-637 (1996)
[文献書誌] Inagaki,M.,Matsuoka,Y.,and Inagaki,N.et al.: "Dynamic property of intermediate filaments : Regulation of phosphorylation." BioEssays. 18. 481-487 (1996)
[文献書誌] Takai,Y.,Inagaki,N.,and Inagaki,M.et al.: "Visualization and regulation of intermediate filament kinase activities." Seminars in Cell and Developmental Biology.7. 741-749 (1996)
[文献書誌] Inagaki,M.,Inagaki,N.,Takahashi,T.,and Takai,Y.: "Phosphorylation-dependent control of structures of intermediate filaments : a novel approach using site-and phosphorylation state-specific antibodies." J.Biochem.JB Review. 121. 407-417 (1997)

1996 年度 実績報告書

細胞分裂後期に特異的に活性化されるCFキナーゼの精製及び遺伝子クローニング

研究代表者

稲垣 昌樹 愛知県がんセンター, 生化学部, 室長 (30183007)

研究成果

[文献書誌] Sekimata,M.,Tsujimura,K.,and Inagaki,M. et al.: "Detection of protein kinase activity specifically activated at metaphase-anaphase transition." J.Cell Biol.132. 635-641 (1996)

[文献書誌] Takai,Y.,Ogawara,M.,and Inagaki,M.et al.: "Mitosis-specific phosphorylation of vimentin by protein kinase C coupled with reorganization of intracellular membranes." J.Cell Biol.133. 141-149 (1996)

[文献書誌] Tsujino,S.,Sekimata,M.,and Inagaki,M.et al.: "Primary structure of ligth and heavy chain variable regions of antibodies recognizing phosphorylated vimentins." Biochem.Biophys.Res.Commun.219. 633-637 (1996)

[文献書誌] Inagaki,M.,Matsuoka,Y.,and Inagaki,N.et al.: "Dynamic property of intermediate filaments : Regulation of phosphorylation." BioEssays. 18. 481-487 (1996)

[文献書誌] Takai,Y.,Inagaki,N.,and Inagaki,M.et al.: "Visualization and regulation of intermediate filament kinase activities." Seminars in Cell and Developmental Biology.7. 741-749 (1996)

[文献書誌] Inagaki,M.,Inagaki,N.,Takahashi,T.,and Takai,Y.: "Phosphorylation-dependent control of structures of intermediate filaments : a novel approach using site-and phosphorylation state-specific antibodies." J.Biochem.JB Review. 121. 407-417 (1997)

1996 年度実績報告書

稲垣昌樹愛知県がんセンター, 生化学部, 室長 (30183007)