超音波画像誘導による生体回収ウシ卵子の発育能力と遺伝子発現に関する研究

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08556045
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 山田 雅保 京都大学, 農学研究科, 助教授 (10243073)
• 研究分担者: 小林 直彦 岐阜県肉用牛試験場, 研究員 ; 藤谷 泰裕 大阪府農業技術センター, 研究員 ; 南 直治郎 京都大学, 農学研究科, 助手 (30212236) ; 細井 美彦 近畿大学, 生物理工学部, 助教授 (70192739) ; 鈴木 達行 山口大学, 農学部, 教授 (00216409)
• キーワード: 超音波画像 / 卵胞液吸引 / インヒビン / 細胞質成熟促進活性 / ミッドカイン / バキュロウイルス

研究概要

これまでに、ウシ卵巣画像から卵胞波の動態を観察し、排卵後に残存する中卵胞の卵胞液を吸引除去することによって、あるいは卵胞液中に存在するFSH分泌抑制効果を持つインヒビンの活性を抗インヒビン抗体で中和することによって、次期卵胞波における小卵胞の著しい発育が誘導され、さらに処置後2日目に過剰排卵処置を常法に従って行うことによって、従来の方法に比べて、安定して過剰排卵が誘起されることを、さらにこのような方法で排卵誘起された胚は移植後、高率に産児まで発育することを明らかにしている。今回、残存卵胞の卵胞液吸引あるいは抗インヒビン抗体投与後に過剰排卵処置を行う方法を、長期間空胎期間が長い繁殖牛に適用したところ、過剰排卵を誘起することが可能になることを、また同一個体においてくり返し処置を行っても、過剰排卵誘起の効果は低下することがないことを明らかにすることができた。一方、体外培養胚の移植後の発育異常をの原因を解明するために、卵子の体内での発生条件を明らかにすることを試みた。まず、卵子の成熟が卵胞液中で行われることから、卵胞液中をヘパリンアフィニティークロマトグラフィーで分画することによって、ヘパリン結合分画中にウシ卵子の成熟と受精後の胚発生を促進する活性(細胞質成熟促進活性)が存在することを明らかにした。卵胞液に存在し、ヘパリンに結合するマウスリコンビナントミッドカインについて検討したところ、ウシ卵子の細胞質成熟促進活性を有することが認められらた。そこで、ウシリコンビナントミッドカインの大量生産を目的に、ウシミッドカインcDNA全配列を決定し、バキュロウイルスでの発現系を確立した。ウシミッドカインは、cDNA配列においてマウスと約70%の相同性を持ち、ウシ卵子の細胞質成熟促進活性、特に胚盤胞への発生率では、マウス由来のものより高いことが明かとなった。

研究成果

• [文献書誌] Hashimoto,S.: "Ultrasound-Guided Follicle Aspiration : The Conection of Bovine Cumulus-oocyte Complexes From Ovaries of Slaughtered or Live Cows." Theriogenology. (in press).
• [文献書誌] Hashimoto,S.: "Ultrasound-Guided Follicle Aspiration : Effect of the Frequency of a Linear Transvaginal Probe on the Cellection of Bovine Oocytes" Theriogenology. (in press).
• [文献書誌] Iwata,H.: "Allopurinol, an inhibitor of xanthine oxidase, improves the development of IVM/IVF bovine embryos in vitro." Theriogenology. (in press).
• [文献書誌] Hashimoto,S.: "Effects of Cumulus Cell Density During In vitro Mataration on the Developmental Competence of Bovine Oocytes" Theriogenology. 49. 1451-1463 (1998)
• [文献書誌] Iwata,H.: "Effects of Antioxidants on the Development of Bovine IVM/IVF Embryos in Variaus Concentrations of Glucose." Theriogenology. 50. 365-375 (1998)
• [文献書誌] Kobayashi,S.: "Embryo Transfer of Bovine Embryos Cellected from Cows with Super-Ovulatory Treatments following aspiration of a dominant follicle." Jpn.J.Embryo Transfer. 20. 78-83 (1998)