| 研究課題/領域番号 |
08557002
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 応募区分 | 試験 |
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
二重作 豊 北里大学, 医療衛生学部, 教授 (50014197)
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| 研究分担者 |
大沢 久雄 (株)ニコン, 技術開発部, 係長
鈴木 正敏 (株)ニコン, 顕微鏡開発部, 係長
関矢 加智子 北里大学, 薬学部, 講師 (30050579)
渡辺 美宰 北里大学, 衛生学部, 助手 (40255360)
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| キーワード | エバネッセント光顕微鏡 / 溶液中 / 光散乱 / AFM / SLO / 生体膜 / 蛋白分子 / 動態観察 |
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| 研究概要 |
直径2nmのSLO分子が、赤血球膜上に形成する直径27nmの孔をリアルタイムに観察し、孔形成の機構を解明する為に、新たに超高分解能のエバネッセント光顕微鏡を開発中である。これまでに究明された孔形成の機構は、まずSLO分子が膜に付着し、次に膜上を移動してSLO分子が会合し、最後に成長したリング状のポリマーが、膜に沈んで孔を開けると言う筋書であるが、最後のステップは、現存の観測機器では補足できない。
1.分解能: 市販のエバネッセント光顕微鏡は、尖らせた光ファイバを金属膜でコートし、先端に微小開口を開け、そこから光を照射または検出するものである。この方式の分解能は開口径で制限され、50nm程度が限界である。今回の用途には分解能が不足である。そこで、AFMプローブの鋭い針先による光散乱を利用した手法を用いることにより、数nm〜10nm程度の分解能を目指した。
2.観察時間: リング形成は37℃では2〜3分で終了する。しかし、プローブ顕微鏡の画像取得時間は数分から十数分かかる。そこで、試料の温度を下げてリング形成の速度を遅くして観察するために、装置に温調器を組み込んだ。
3.装置構成: 市販の倒立顕微鏡のステージ上に液中観察用に開発したAFMヘッドを載せる。試料はステージ上の温調器のシャーレに入れる。微分干渉の照明系で試料を照射し、AFMプローブで表面のエバネッセント場を散乱させる。検出は光学顕微鏡の光学系を介し出力ポートの外に光検出器を配置した。
4.装置開発の進行状況: エバネッセント光の検出方式の検討後、装置の設計・製作を行い、現在試料の観察をしながら調整中である。
5.試料の調整: 装置の調整と改良の為に、種々の固さの試料を準備した。
平成8年度は、装置の開発に主眼を置き、本年度の計画は達成されつつある。
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